М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я. В чашку Петри с прозрачной питательной средой помещают полоску стерильной фильтровальной бумаги, пропитанную антитоксической противодифтерийной сывороткой

В чашку Петри с прозрачной питательной средой помещают полоску стерильной фильтровальной бумаги, пропитанную антитоксической противодифтерийной сывороткой. Исследуемые культуры засевают в виде бляшек по обе стороны от полоски фильтровальной бумаги. В качестве контроля используют заведомо токсигенную культуру C. diphtheriae.

Чашки инкубируют при 37°С в течение 24-48 ч. При диффузии в агаре в зоне эквивалентных концентраций антигена и антител образуются иммунные комплексы, хорошо видимые в проходящем свете в виде мутных полос – «усов» или дуг преципитации. Достоверность результатовподтверждается наличием дуг преципитации с заведомо токсигенной культурой.

Положительная реакция преципитации свидетельствует о токсигенности исследуемой культуры, отрицательная – об ее нетоксигенности.

З а д а н и е №6

Учесть результаты индикации и идентификации ботулинического токсина в пищевом продукте в реакции нейтрализации токсина антитоксином на мышах. Результаты представлены в таблице. Оформить протокол. Ответить на вопросы:

1. Какой метод диагностики применен?

2. Какая поставлена реакция?

3. Определить наличие и тип ботулинического токсина.

Ингредиенты/ мыши
1. Экстракт пищевого продукта	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
2. Смесь антитоксических противоботулинических сывороток	–	0,5	–	–	–	–	–
3. Сыворотка типа А	–	–	0,5	–	–	–	–
4. Сыворотка типа В	–	–	–	0,5	–	–	–
5. Сыворотка типа С	–	–	–	–	0,5	–	–
6. Сыворотка типа Е	–	–	–	–	–	0,5	–
7. Сыворотка типа Д	–	–	–	–	–	–	0,5
Результаты эксперимента на мышах	погиб.	жива	погиб.	жива	погиб.	погиб.	погиб.

З а д а н и е №7

Классифицировать набор предложенных иммунобиологических диагностических препаратов. Результаты представить в виде схемы.

Название (Н):

Классификационное положение (КП):

Действующее начало (ДН):

Получение (П):

Применение (Пр):

Способ применения (СП):

Занятие №10

Антитела. Реакции иммунитета

Реакции сложной агглютинации, связывания комплемента,

С применением меченых антител (РИФ, ИФА)

Вопросы для подготовки

1. Антитела. Классы иммуноглобулинов, строение и функции.

2. Методы количественного определения (радиальная иммунодиффузия по Манчини).

3. Динамика синтеза антител, механизм переключения синтеза антител одного класса на другой. Первичный и вторичный иммунный ответ.

4. Моноклональные антитела: определение, достоинства и получение.

5. Реакция Кумбса, ингредиенты, механизм, применение.

6. Реакция непрямой и обратной гемагглютинации (РНГА и РОНГА), ингредиенты, механизм, применение.

7. Реакция Ко-агглютинации и латекс-агглютинации, ингредиенты, механизм, применение.

8. Лизины, бактериолизины. Реакция связывания комплемента, ингредиенты, механизм, применение.

9. Реакция иммунофлюоресценции, ингредиенты, механизм, применение.

10. Иммуноферментный анализ, ингредиенты, механизм, применение.

11. Флюоресцирующие иммунные сыворотки, получение, применение.

12. Схематично зарисовать структуру IgG. Указать: Fab-, Fc-фрагменты; H-, L-цепи; домены; рецептор для комплемента; активный центр.

Практическая работа

З а д а н и е №1

Учесть результаты реакции непрямой гемагглютинации, поставленной с целью определения титра антител в парных сыворотках больного с клиническим диагнозом «грипп?». Сделать заключение. Зарисовать механизм реакции. Ответить на вопросы:

1. Какой метод диагностики использован?

2. Что такое титр антител? Каковы титры антител на 3-й и 10-й лень болезни?

3. Зачем исследуют парные сыворотки больного?

Разведения сыворотки	1:40	1:80	1:160	1:320	1:640	Ксыв.	КAg
Сыворотка больного, мл	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	–
Физиологический раствор, мл	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0
Гриппозный диагностикум, капли						–
24 ч инкубации при 37°С
3-й день (+/-)
10-й день (+/-)