1 Приготовить необходимые для работы питательные среды.
Наиболее распространенным способом количественного учета микроорганизмов является метод Коха. Сущность метода заключается в высеве определенного объема исследуемой суспензии микроорганизмов на твердую среду в чашки Петри и последующем подсчете числа выросших колоний. При этом принимают, что каждая колония образуется при размножении из одной клетки – колониеобразующей единицы (КОЕ). Этот метод позволяет вести учет не только жизнеспособных клеток микроорганизмов.
В зависимости от объекта исследования может производиться его специальная подготовка: измельчение, растворение, приготовление смыва, разбавление и т.д.
Приготовление плотной питательной среды.
К 300-500 мл горячей воды добавить сухую питательную среду и агар. Количество сухой среды зависит от её конкретного вида и указывается на упаковке. Агар вносится в количестве 2-3 % от общей массы питательной среды. Смесь нагревают на плитке при постоянном помешивании до полного растворения агара и далее стерилизуют.
Одним из способов стерилизации питательных сред, который не требует использования специального оборудования, является метод дробной стерилизации. В основе метода положен следующий принцип: при нагревании до 100 оС в течение 30-60 мин погибают все вегетативные формы микроорганизмов, споры остаются жизнеспособными, а в промежутке между стерилизацией прорастают вегетативную форму. Через сутки проводят повторную стерилизацию. Обычно после третьей стерилизации достигается полное обеспложивание объекта.
После стерилизации питательную среду при необходимости фильтруют через вату и разливают по чашкам Петри по 15-20 мл при этом крышки чашки только поднимают и после внесения среды сразу закрывают. Слой среды должен быть тонким и покрывать все дно чашки. Чашки оставляют на ровной поверхности до полного застывания среды.
2 Произвести посевы микроорганизмов на плотные среды в чашки Петри.