Методы микроскопии

І. Световая микроскопия.

Для световой микроскопии применяют искусственное освещение объекта, которое создают специальными осветителями.

Увеличение микроскопа = увеличение объектива × увеличение окуляра.

Увеличение светового микроскопа 900-1000 раз.

Разрешающая способность микроскопа - это минимальное расстояние между двумя точками, которые видны раздельно.

Разрешающая способность светового микроскопа 0,2 мкм.

Светлопольна микроскопия.

Этот метод наиболее распространен. Чтобы увидеть микроорганизмы, необходимо повысить их контрастность. Для этого применяют разные методы окраски. В процессе приготовления препарата-мазка микроорганизмы погибают. В светлопольном микроскопе объект виден в поле зрения на светлом фоне.

Темнопольная микроскопия.

Светлые объекты (микроорганизмы) видны в поле зрения на черном фоне. Применяется специальный конденсор темного поля. Объект освещается не снизу (как в светлопольном микроскопе), а сбоку. В объектив попадают отображенные от объекта лучи.

Метод позволяет исследовать живые микроорганизмы, их окраска не нужна.

Фазово-контрастная микроскопия.

Световая волна, проходя через объект, изменяет фазу (отстает по фазе от соседних волн). Глаз человека не замечает отличия по фазе, а выявляет только отличия в длине волны (цвет) и в амплитуде (контрастность). Фазово-контрастное устройство позволяет превращать отличия по фазе в изменения амплитуды, в результате чего прозрачные объекты становятся контрастными и хорошо видимыми. Микроорганизмы видны в виде темных (черных) объектов на светлом фоне.

Метод позволяет исследовать живые микроорганизмы.

Люминесцентная микроскопия.

Некоторые вещества способны светиться под воздействием падающего на них света. Это явление называется люминесценция (флюоресценция). Микроорганизмы имеют очень слабую собственную (или первичную) люминесценцию. Поэтому их окрашивают специальными красителями - флюорохромами (акридин оранжевый, берберин, аурофосфин и др.). Они окрашивают не только микробную клетку, но и избирательно определенные структуры, вызывая их свечение. Для микроскопии применяют люминесцентный микроскоп, в котором объект освещается коротковолновой частью видимого спектра, - сине-фиолетовые лучи с длиной волны 460 нм.