2015-06-05
1294
Методика. Продукт измельчают, растирают в стерильной ступке до однородной консистенции, добавляя физраствор до соотношения 1: 1. Полученную смесь экстрагируют в холодильнике в течение 2 ч. Затем процеживают через ватно-марлевый фильтр. Полученный фильтрат переносят в две пробирки по 3 мл, в третью — 2,7 мл фильтрата, в который добавляют 0,3 мл раствора трипсина, устанавливают рН 6,0 и помещают в термостат на 1 ч, периодически перемешивая.
Содержимое первой пробирки оставляют без обработки, а второй кипятят в водяной бане 10 мин для разрушения ботулинического токсина и охлаждают до комнатной температуры. Биопробу ставят на белых мышах массой 15–20 г, которым вводят внутрибрюшинно по 0,5 мл исследуемых фильтратов. Наблюдение за животными проводят через 1, 2, 4, 12 ч, далее— 2 раза в день в течение 3 суток. Клинические симптомы ботулинической интоксикации появляются через 10–12 ч, токсином типа Е— через 2–4 ч. При этом у мышей шерсть взъерошена, дыхание затруднено, мышцы брюшной стенки ослаблены и западают («осиная талия»), наблюдаются судороги, паралич задних конечностей. Гибель животных наступает через 4–6 ч, а при высоких концентрациях токсина — в течение 1–2 ч без характерных признаков, в этих случаях биопробу повторяют с разведением исходной жидкости 1: 10–1: 100.
|
|
|
При наличии в материале ботулинических токсинов вначале болеют и погибают те животные, которым введена непрогретая исходная жидкость или обработанная протеолитическим ферментом. После инъекции прокипяченной жидкости мыши остаются здоровыми на протяжении всего опыта.
Для индикации и определения количества золотистого стафилококка делают посев исследуемых консервов с использованием селективно-диагностических сред по следующей схеме:высев навеска; подсчет колоний с характерными для стафилококка признаками; идентификацию выделенных культур. Еслив посевах обнаружены грамположительные кокки, способныекоагулировать плазму крови, образующие каталазу, ферментирующие мальтозу в анаэробных условиях, то выявленные микроорганизмы относят к Staph. аureus. При определении потенциальной энтеротоксичности выделенных культур Staph. аureus устанавливают их способность образовывать термостабильную нуклеазу по следующей методике:
-готовят суточную культуру изучаемого стафилококка в МПБ и прогревают ее 15 мин в кипящей бане;
-готовят чашки Петри с МПА, содержащим ДНК, асептически вырезают «колодцы» диаметром 4 мм на расстоянии 7–8 мм друг от друга;
-в данные колодцы вносят по 1–2 капли прогретой бульонной культуры Staph. аureus;
-чашки помещают в термостат, результаты учитывают через 1, 2 и 5 ч. При наличии термостабильной нуклеазы вокруг «колодцев» появляется ярко-розовая зона на синем фоне среды.
