Отдельных ферментов

Ц е л и р а б о т ы:

1. Изучить действие отдельных ферментов на субстрат;

2. Провести реакции обнаружения конкретных ферментов.

1. Обнаружение действия пепсина.

Пепсин является гидролазой. Пепсин - протеолитический пищеварительный фермент. Пепсин катализирует протеолиз, разрывает пептидные связи белковых молекул по месту присоединения фенилаланина и тирозина. Пепсин является ферментом желудка, вырыбатывается обкладочными клетками слизистой желудка, входит в состав желудочного сока. Профермент пепсина - пепсиноген, активатор - соляная кислота (ионы водорода). Оптимум рН для пепсина 1,5-2,5. Превращение пепсиногена в пепсин происходит при рН<5. Данная реакция является автокаталитической, сам пепсин активирует превращение зимогена в фермент:

Н⁺

Пепсиноген Пепсин + Пептид

М.м = 42000 М.м =34500 М.м=7500

В процессе активации происходит отщепление пептида с молекулярной массой 7500. Пепсин - фосфопротеид, его молекула содержит 321 аминокислоту, причем преобладают дикарбоновые аминокислоты, такие, как глутаминовая и аспарагиновая. Молекулярная масса пепсина 34500.

Пепсин устойчив до рН = 5,5, при рН>6,5 пепсин инактивируется. Пепсин проявляет створаживающую активность, например створаживает молоко при рН = 5,5. Под действием пепсина казеин (белок молока) образует с кальцием молока нерастворимую соль, коагулирует.

Оборудование, реактивы:

Пробирки; баня водяная; сок желудочный (или раствор пепсина); молоко; карбонат кальция (CaCO₃).

Порядок выполнения работы:

В три пробирки наливают по 1 мл свежего молока. В первую пробирку добавляют 2-3 капли желудочного сока (активного фермента), во вторую - 2-3 капли прокипяченного желудочного сока, в третью - 2-3 капли желудочного сока, нейтрализованного (CaCO₃) по лакмусу.

Пробирки помещают в термостат и 20 мин выдерживают при температуре 37 ⁰С. Отмечают пробирки, в которых наблюдалось створаживание молока и делают выводы об активности фермента, а также влияние ряда факторов (рН, t) на активность пепсина.