2015-06-26
2189
Ц е л ь р а б о т ы - количественно определить активность амилазы слюны.
Метод определения амилазной активность по Вольгемуту является «пороговым». Основан на определении минимального «порогового» количества фермента, способного расщепить 1 мл 0,1%-го раствора крахмала за 30 мин при температуре 36 0С. Данное минимальное количество фермента принимают за единицу амилазной активности.
Амилазная активность слюны (амилокластическая сила слюны - А) выражается количеством мл 0,1%-го раствора крахмала, которое расщепляется 1 мл неразведенной слюны при температуре 38 0С в течение 30 мин,
А = V(крахмала).
V(слюны)
В норме амилазная активность слюны (А3830) равна 160-320 мл.
Оборудование, реактивы:
Пробирки; термостат; раствор крахмала (0,1%-й); слюна (1%-й раствор); вода дистиллированная; хлористый натрий (0,1%-й раствор).
Порядок выполнения работы:
Готовят два набора по шесть пробирок. В каждую пробирку одного набора вносят по 1 мл слюны (разведение 1:10, 1:20, 1:40 и т.д.). Таким образом, в каждом наборе получают аналогичное разведение фермента амилазы слюны.
Во все пробирки первого набора добавляют по 1 мл воды, во все пробирки второго набора - по 1 мл 0,1%-го раствора NaCl (NaCl - активатор амилазы). Во все пробирки добавляют по 2 мл 0,1%-го раствора крахмала. Содержимое перемешивают и пробирки помещают в термостат на 30 мин при температуре 38 0С. Через 30 мин в пробирки добавляют по 1 капле 1%-го раствора йода. Результатом работы по определению амилазной активности фиксируют в форме табл. 18. Заполняют таблицу. Синяя окраска свидетельствует о том, что расщепления крахмала нет, желтая -
о максимальной активности амилазы.
Таблица 18
| Показатель | Н о | м е р | п р о | б и р | к и | Амилазная активность | |
| Разведение слюны, Р | |||||||
| Окраска при добавлении йода, ряд без добавления NaCl | |||||||
| Окраска при добавлении йода, ряд с добавлением NaCl |
| Расчетная формула: А = Vкп*Р, |
где Р - максимальное разведение слюны, при котором начинается гидролиз; Vкп - объем 1%-го раствора крахмала, Vкп = 2 мл;
А - амилазная активность исследуемой слюны.
Полученное значение амилазной активности сравнивают с амилазной активностью в норме, делают выводы.
Вопросы для самоконтроля:
1. Дайте определение ферментов.
2. Каковы отличия ферментов от неорганических катализаторов?
3. Приведите классификацию ферментов.
4. Приведите примеры оксидоредуктаз. Охарактеризуйте ферменты дыхательной цепи.
5. Что такое протеолиз? Охарактеризуйте пищеварительные протеолитические ферменты.
6. Назовите тканевые протеазы мышечной ткани рыб.
7. В чем проявляется специфичность действия ферментов?
8. Объясните влияние рН на активность ферментов.
9. Охарактеризуйте влияние температуры на активность ферментов.
10. Объясните механизм ферментативного катализа. Что такое константа Михаэлиса?
11. Что такое липолиз? Липогенез?
12. Охарактеризуйте пищеварительные липолитические ферменты.
13. Какие ферменты относятся к тканевым липолитическим?
14. Объясните биологическую роль желчных кислот. Приведите примеры желчных кислот.
15. Какие ферменты слюны Вы знаете? Какой метод используется для количественного определения активности амилазы?
16. Охарактеризуйте ферменты, участвующие в переваривании углеводов в кишечнике.
17. Какие динуклеотидные коферменты Вы знаете?
18. Какие методы используются для количественного определения активности пепсина, трипсина, липазы?
19. Какова биологическая роль каталазы?
20. Каков состав желудочного сока? Какой метод используется для определения кислотности желудочного сока?
21. Какова биологическая роль лизоцина?
22. Что такое проферменты (зимогены)? Приведите примеры.
23. Какие соединения являются активаторами ферментов, какие - ингибиторами?
24. Какие ферменты контролируют анаэробный распад углеводов в мышечной ткани?
25. Какова биологическая роль фенолоксидазы?
26. Что такое декстрины? Какова биологическая роль декстриназы?
27. Объясните автолиз. Какие ферменты участвуют в автолизе?
28. Охарактеризуйте состав панкреатического сока.
29. Как используются ферменты в рыбной промышленности?
30. Какова биологическая роль лизоцина?
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
ВОПРОСЫ И ВАРИАНТЫ ОТВЕТОВ
Тема 1. Аминокислоты и белки.
Вопрос 1. Какие аминокислоты относятся к незаменимым аминокислотам?
1. Фенилаланин;
2. Глицин
3. Аланин;
4. Пролин;
5. Оксипролин.
Вопрос 2. Какие из указанных белков являются простыми белками?
1. Нуклеопротеиды;
2. Фосфопротеиды;
3. Альбумины;
4. Гликопротеиды;
5. Хромопротеиды.
Вопрос 3. Укажите заменимую аминокислоту.
1. Валин;
2. Лейцин;
3. Лизин;
4. Аспарагиновая кислота;
5. Изолейцин.
Вопрос 4. Какие белки являются биологически полноценными?
1. Коллаген;
2. Эластин;
3. Миозин;
4. Эластоидин;
5. Тропоколлаген.
Вопрос 5. Какие белки являются белками миофибриллярной фракции мышечной ткани?
1. Актин;
2. Миоген;
3. Гемоглобин;
4. Эластин;
5. Миоглобин.
Вопрос 6. Какой белок участвует в мышечном сокращении?
1. Актомиозин;
2. Коллаген;
3. Фибрин;
4. Гистон;
5. Эластин.
Вопрос 7. Укажите характерное свойство белков.
1. Денатурация.
2. Осаливание.
3. Прогоркание.
4. Образование жирных кислот.
5. Эмульгирование жиров.
Вопрос 8. Какая аминокислота является незаменимой аминокислотой?
1. Глутаминовая;
2. Цистеин;
3. Метионин;
4. Аланин;
5. Тирозин.
Вопрос 9. Какие белки входят в состав нуклеопротеидов?
1. Глобулины;
2. Гистоны;
3. Проламины;
4. Альбумины;
5. Фосфопротеиды.
Вопрос 10. Какие белки являются белками саркоплазматической фракции?
1. Миозин;
2. Миоген;
3. Актин;
4. Эластин;
5. Тропонин.
Вопрос 11. Какая реакция является универсальной реакцией на белки?
1. Реакция Майара;
2. Биуретовая реакция;
3. Реакция Фоля;
4. Реакция Сакагучи;
5. Ксантопротеиновая реакция.
Вопрос 12. Укажите продукты распада серосодержащих аминокислот.
1. Индол;
2. Меркаптан;
3. Фенол;
4. Гистамин;
5. Тирамин.
Вопрос 13. Какие белки являются белками сарколеммы?
1. Коллаген;
2. Миоген;
3. Актин;
4. Тропонин;
5. Тропомиозин.
Вопрос 14. Какова норма потребления белка взрослым организмом?
1. 10 г/кг веса;
2. 3-4 г/кг веса;
3. 1,5-2,0 г/кг веса;
4. 8 г/кг веса;
5. 12 г/кг веса.
Вопрос 15. Что такое “сырой протеин”?
1. Белок + вода;
2. Белок + небелковые азотосодержащие вещества;
3. Летучие азотистые основания;
4. Белок + жиры;
5. Свободные аминокислоты.
Тема 2. Ферменты.
Вопрос 1. Укажите протеолитический фермент желудочно-кишечного тракта.
1. Липаза;
2. Птиалин;
3. Трипсин;
4. Фосфолипаза;
5. Лактаза.
Вопрос 2. Какой фермент относится к тканевым протеолитическим ферментам?
1. Липаза;
2. Мальтаза;
3. Пепсин;
4. Катепсин
5. Трипсин.
Вопрос 3. К какому классу ферментов относятся протеолитические ферменты?
1. Оксидоредуктазы;
2. Лиазы;
3. Гидролазы;
4. Изомеразы;
5. Лигазы.
Вопрос 4. К какому классу ферментов относятся карбогидразы?
1. Гидролазы;
2. Трансферазы;
3. Лигазы;
4. Изомеразы;
5. Лиазы.
Вопрос 5. Какой фермент является протеолитическим ферментом кишечника?
1. Трипсин;
2. Катепсин;
3. Липаза;
4. Пепсин;
5. Холестераза.
Вопрос 6. Какой фермент входит в состав желудочного сока?
1. Амилаза;
2. Холестераза;
3. Пепсин;
4. Трипсин;
5. Химотрипсин.
Вопрос 7. Какие соединения являются ферментами?
1. Лактоза;
2. Гемоглобин;
3. Гастриксин;
4. Агар-агар;
5. Каррагенин.
Вопрос 8. Укажите процесс, определяющий созревание соленой рыбы.
1. Липогенез;
2. Гликолиз;
3. Глюконеогенез;
4. Автолиз;
5. Асфиксия.
Вопрос 9. К какому классу ферментов относится каталаза?
1. Гидролазы;
2. Оксидоредуктазы
3. Изомеразы;
4. Лиазы;
5. Лигазы.
Вопрос 10. Укажите диапазон рН, при котором проявляет максимальную активность пепсин.
1. рН = 3-4;
2. рН = 7-8;
3. рН = 1,5-2,0;
4. рН = 10-12;
5. рН = 8-10.
Вопрос 11. Укажите диапазон рН, при котором проявляет максимальную активность трипсин.
1. рН = 1-2;
2. рН = 7,8-8,2;
3. рН = 3-4;
4. рН = 8-10;
5. рН = 10-12.
Вопрос 12. Укажите активатор трипсина.
1. Энтерокиназа;
2. Ионы водорода;
3. Желчные кислоты;
4. Ионы хлора;
5. Ионы железа.
Вопрос 13. Укажите оптимум рН для гастриксина.
1. рН = 1,5-2,0;
2. рН = 3-4;
3. рН = 7-8;
4. рН = 8-10;
5. рН = 10-12.
Вопрос 14. Какой фермент контролирует гидролиз крахмала?
1. Трипсин;
2. Липаза;
3. Фосфолипаза;
4. Амилаза
5. Холестераза.
Вопрос 15. Какие соединения являются активаторами липазы?
1. Аминокислоты;
2. Желчные кислоты;
3. Фосфолипаза;
4. Трипсин;
5. Энтерокиназа.
Вопрос 16. Какое соединение является ферментом?
1. Глицин;
2. Сахароза;
3. Энтерокиназа;
4. Аланин;
5. Альгиновые кислоты.
Вопрос 17. Какой фермент содержится в слюне?
1. Пепсин;
2. Химотрипсин;
3. Лизоцим;
4. Сахараза;
5. Лактаза.
Вопрос 18. Какой фермент является пищеварительной карбогидразой?
1. Декарбоксилаза;
2. Мальтаза;
3. Фосфорилаза;
4. Трипсин;
5. Пепсин.
Вопрос 19. Укажите липолитический фермент.
1. Холестераза;
2. Энтерокиназа;
3. Декарбоксилаза;
4. Трипсин;
5. Химотрипсин.
Вопрос 20. Какой фермент относится к гликозидазам?
1. Гастриксин;
2. Сахараза;
3. Химозин;
4. Катепсин;
5. Лизоцим.
