Осадочные пробы

Применение осадочных проб с диагностической целью основано на изменениях устойчивости белков плазмы при некоторых заболеваниях. В норме белки в плазме крови находятся в коллоидном состоянии и отличаются высокой устойчивостью. При постановке осадочных проб, которые сопровождаются химическим или физическим вмешательством наступает преципитация белков, приводящая к помутнению или образованию хлопьев. Основные осадочные пробы: тимоловая проба, сулемовая проба, проба Вельтмана.

Тимоловая проба

Тимоловый реактив представляет собой насыщенный водный раствор тимола в буфере. Проба является положительной при уменьшении альбуминов и увеличении β- и γ-глобулинов.

Принцип метода: при взаимодействии сыворотки крови с тимолово-вероналовым раствором появляется помутнение вследствие образования глобулино - липидного комплекса.

Реактивы:

1. Тимол, 10%-ный спиртовый раствор: 10 г очищенного тимола растворяют в 96%-ном этиловом спирте в мерной колбе вместимостью 100 мл.

2. 5,5 Диэтилбарбитуровая кислота (веронал).

3. Мединал (диэтилбарбитуровой кислоты натриевая соль).

4. Буферный раствор: 2,76 г веронала и 2,06 г мединала растворяют и доводят до 1 л водой.

5. Тимоло-вероналовый буфер рН 7,55-7,6: в мерной колбе на 100 мл смешивают 80 мл буферного раствора и 1 мл 10%-ного спиртового раствора тимола, встряхивают и доливают буферным раствором до метки.

6. Бария хлорид.

7. Калибровочный раствор:

a. раствор хлорида бария 1,175 г хлорида бария растворяют и доводят до 100 мл водой.

b. серная кислота 0,1 моль/л. Суспензия сульфата бария: 3 мл раствора хлорида бария наливают в мерную колбу на 100 мл и доводят объем до метки 0,1 моль/л раствором серной кислоты.

8. Материал для исследования: сыворотка свободная от гемолиза.

Ход определения: К 6 мл тимолово-вероналового буферного раствора прибавляют 0,1 мл сыворотки, оставляют на 30 минут и затем измеряют оптическую плотность при длине волны 630-690 нм (красный светофильтр) против тимолово-вероналового буфера в кюветах с толщиной 1 см. Реакцию проводят при комнатной температуре. Расчет ведут по калибровочному графику.

Построение калибровочного графика: из калибровочного раствора сульфата бария (суспензия) готовят разведения, соответствующие единицам помутнения. Калибровочные растворы хорошо встряхивают и при длине волны 630-690 нм в кюветах с толщиной слоя 1 см против воды измеряют.

Нормальные величины: 0-4 ед.