2015-08-13
346
ДНК амплифицировали с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Мы использовали полимеразу Taq (Dynazyme, Finnzymes, Эспоо, Финляндия) при условиях, описанных с других источниках. Используемым прямым праймером являлся 5’-CCTCGTTAATACCCACTGACCTA-3’, а обратным праймером являлся 5’-GTCACTTTGATATGATGAGAGCA-3’, которые охватывали около 400 bp областей по обеим сторонам
Хабарова Ю. и др. Распространенность генотипов С/Т в России 1851
|
| Таблица 1. Распределение генотипов персистенции лактазы/ непереносимости лактозы по этнической принадлежности, n (%) | ||||
| СС-139101 | СТ-139102 | ТТ-139102 | Всего | |
| Русские | 53 (35,6) | 76 (51,0) | 20 (13,4) | 149 (100) |
| Прочие | 9 (42,8) | 11 (52,4) | 1 (4,8) | 21 (100) |
| Информация отсутствует | 22 (36.1) | 26 (42,6) | 13 (21.3) | 61 (100) |
| Всего | 84 (36,5) | 112 (48,7) | 34 (14,8) | 231 (100) |
1 Генотип непереносимости лактозы 2 Генотип персистенции лактазы
|
|
|
| Таблица 2. Потребление молочных продуктов при разных вариантах генотипа С/Т -13910, n (%) | |||
| Потребление | СС-139101 | СТ-13910 и ТТ-139102 | Всего |
| Молоко | |||
| Да | 31 (36,9) | 71 (48.3) | 102 (44.2) |
| Нет | 53 (63.1) | 76 (51,7) | 129 (55,8) |
| Всего | 84 (100) | 147 (100) | 231 (100) |
| Кисломолочные продукты | |||
| Да | 41 (48,8) | 89 (60,5) | 130 (56.3) |
| Нет | 43 (51.2) | 58 (39,5) | 101 (43,7) |
| Всего | 84 (100) | 147 (100) | 231 (100) |
1 Генотип непереносимости лактозы 2 Генотип персистенции лактазы
варианта С/Т-13910. Продукт ПЦР верифицировали методом электрофореза в 1,5% агарозном геле (с этидиум бромидом). Продукты ПЦР очищали с использованием щелочной фосфатазы из креветок (USB) и экзонуклеазы I (New England Biolabs) при 37°С в течение 60 мин и при 80°С в течение 15 мин.
При секвенировании терминатор BigDye 3.1 (Applied Biosystems) использовался в соответствии с инструкциями изготовителя. Условия секвенирования были следующими: 96°С в течение 1 мин, затем 25 циклов при 96°С в течение 10 с, 55°С в течение 5 с и 60°С в течение 4 мин. Реакция секвенирования проводилась после очистки с помощью пластинок Millipore Multiscreen (Millipore, США) с сефарозой Sephadex G-50 Superfine (Amersham Biosciences, Швеция), электрофореза с использованием анализатора ДНК ABI 3730 (Applied Biosystems) и восстановления последовательности оснований с помощью программного обеспечения для анализа секвенирования 5.2 (Applied Biosystems). Полученную последовательность анализировали с использованием программного обеспечения Sequencher 4.6 (Gene Codes, США)(23).
Статистический анализ
Для оценки различия между группами генотипа по потреблению молока использовался критерий хи-квадрат. Статистически значимым считалось значение Р< 0,05.
|
|
|
