Неоангиогенез — сложный многоступенчатый процесс, на каждом этапе которого задействованы различные регуляторные пути. К факторам, способствующим росту сосудов относятся ростовые факторы: кислый и основной факторы роста фибробластов (aFGF и bFGF), сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), белки клеточной адгезии, белки матрикса, матриксные металлопротеиназы (MMP). Ангиогенная эффективность многих из них показана на моделях ишемии миокарда и скелетных мышц животных, однако в клинических исследованиях основная доля приходится на VEGF и фактор роста фибробластов (FGF) (Парфенова и Ткачук, 2000). VEGF165 был первой идентифицированной изоформой семейства васкулярных эндотелиальных факторов роста. VEGF165 является основным сосудистым эндотелиальным фактором роста в человеческих тканях, поэтому нашел свое применение в качестве мощного проангиогенного препарата при моделировании процесса неоангиогенеза. Получение природного VEGF очень дорогостоящая процедура, и поэтому представляет большой интерес получение VEGF генно-инженерными методами. Применение в медицине препаратов, полученных гено-инженерным способом растёт, так как получение биологически активных белков из природных источников является, как правило, очень сложным и, как сказано выше, дорогостоящим процессом. Так рекомбинантный интерферон существенно выигрывает в сравнении с лейкоцитарным, вследствие низкой себестоимости и отсутствии контаминации конечного продукта вирусами человека (Cantell, 1998). Поэтому экспрессия чужеродных генов биотехнологическим способом представляет собой уникальную возможность для продукции важных фармацевтических препаратов.
|
|
Целью дипломной работы являлось получение рекомбинантного васкулярного эндотелиального фактора роста 165 человека, создание штамма продуцента, разработка методики выделения и очистки. Для решения поставленной цели были определенны следующие задачи:
1. Получить высокоэффективный штамм-продуцент E.coli, продуцирующий рекомбинантный сосудистый эндотелиальный фактор роста.
2. Подобрать условия культивирования штамма-продуцента сосудистого эндотелиального фактора роста.
3. Разработать схему выделения и очистки рекомбинатного сосудистого эндотелиального фактора роста.
Литературный обзор
Общие сведения о Васкулярных эндотелиальных факторах роста