2015-10-16
2736
Методически выявление аутоантител отличается от других лабораторных тестов, так как оно предполагает определение не только концентрации, которая характеризуется числом молекул иммуноглобулина, реагирующих с антигеном, но и аффинности, указывающей на сродство антител к антигену. Широко распространенный метод иммуноферментного анализа измеряет преимущественно концентрацию аутоантител, и его результаты часто зависят от концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови.
С помощью другого важного метода серологической диагностики — непрямой иммунофлуоресценции — измеряется преимущественно аффинность. Этот метод позволяет определить конечный титр, который зависит от силы связывания антитела с антигеном. Существенно снизить стоимость обследования пациентов позволяет метод иммуноблота. В этом случае несколько антигенов наносятся на мембрану-подложку, а связывание аутоантител с антигенами детектируется с помощью хромогенного субстрата, образующего нерастворимый преципитат. За счет этого может быть одновременно исследовано связывание антител с 15 и более антигенными белками.
|
|
|
Выявление аутоантител обычно происходит в два этапа: на первом этапе тестирования применяется наиболее чувствительный метод, в котором используется максимально широкий спектр антигенов. Наиболее подходящим для этого является метод непрямой иммунофлуоресценции (табл. 2). Обычно тканевой субстрат содержит широкий спектр тканевых антигенов, который позволяет не только установить связывание антител с предполагаемым антигеном, но и исключить неспецифические реакции.
Таблица 2. Пример использования метода непрямой иммунофлуоресценции (нРИФ) для выявления антинуклеарных антител (а), антинейтрофильных антител (б) и
антител при аутоиммунных заболеваниях печени (в) (реактивы компании «EUROIMMUN», Германия)
А)
Б)
В)
Кроме того, может быть установлено присутствие других разновидностей полиспецифичных аутоантител, например антинуклеарных или антимитохондриальных. Уточнение специфичности обнаруженных аутоантител возможно при использовании подтверждающих тестов, назначенных по результатам первичного тестирования. В качестве подтверждающих тестов целесообразно использовать методы, основанные на иммуноферментном анализе или иммуноблоте, в которых применяются высокоочищенные или рекомбинантные антигены.
