Опыт № 1. Изучение спирохет

а) Приготовление мазка из зубного налета

1. Небольшое количество зубного налета снять острым концом зубочистки.

2. Растереть на предметном стекле размером с пятикопеечную монету.

3. Мазок зафиксировать путем трехкратного проведения над пламенем горелки.

4. Мазок окрасить по Граму.

5. Промыть водой.

6. Высушить фильтровальной бумагой и на воздухе.

7. Микроскопировать.

б) Окраска препарата по Граму

1. Небольшое количество генцианвиолета налить на препарат; время окраски – 2 мин.

2. Избыток краски слить в лоток, на препарат нанести пипеткой несколько капель раствора Люголя на 1 минуту.

3. На препарат налить несколько капель спирта, обесцвечивание проводить до отхождения фиолетовых капель – струи краски, но не более 30 с.

4. Мазок тщательно промыть водой.

5. Мазок докрасить разведенным фуксином – 2 мин.

в) Микроскопирование препарата

1. Установить освещение: конденсор должен быть поднят до упора, настройку производить с объективом малого увеличения 8-х – необходимо белое освещенное поле.

2. Препарат поместить на предметный столик.

3. Макровинтом опустить объектив на расстояние 0,5 см от препарата.

4. Глядя в окуляр, получить изображение препарата, вращая макровинт против часовой стрелки (на себя).

5. Произвести точную фокусировку с помощью микровинта.

6. Переместить револьвер на большое увеличение (объектив 40-х) и провести дефокусировку только микровинтом.

7. После просмотра препарата перевести револьвер на увеличение 8-х (малое) и только после этого снять препарат с предметного столика.

Зубные спирохеты чрезвычайно тонкие, почти волосовидные, ко­роткие (всего 2–3 завитка).

 

Оформление и анализ результатов исследований

В отчете студенты должны кратко законспектировать теоретический материал. Наблюдаемые под микроскопом картины нужно зарисовать и сделать заключение о морфологии зубного налета. Под рисунками необходимо указать увеличение и подписать название изучаемого объекта.

 

В результате работы студенты изучат технику посева, методы приготовления препаратов микроорганизмов, фиксацию препаратов; методы окрашивания препаратов и классификацию красителей; изучат способ окрашивания микроорганизмов по Граму, микроскопировать.

Контрольные вопросы

1.Как проводится отбор проб чистой культуры микроорганизма?

2.Перечислите основные этапы приготовления фиксированного окрашенного препарата.

3. Как проводят окрашивание по Граму?

4. Перечислить техники посева микроорганизмов. Как их проводить?

5. Перечислить последовательность действий при микроскопировании.

6. Как проводят окрашивание по Цилю–Нильсену, по Романовскому–Гимзе?

 

[3, с. 54 – 60; 10, с. 10 – 20; 12, с. 10 – 20; 13, с. 10 – 20]