Сборка вирусных частиц

6.Выход вирионов из клетки.

Культивирование вирусов

В исследуемом материале, получаемом от зараженного человека, содержится сравнительно небольшое количество вирусных частиц, которые трудно определить обычными методами.

Для того, чтобы изучать, идентифицировать вирусы и диагностировать вирусные инфекции необходимо выделять вирусы из исследуемого материала, а это делают путем культивирования.

Поскольку вирусы – обязательные внутриклеточные паразиты, культивировать их можно только в живых системах.

Перед заражением исследуемый материал (смывы, мокрота, испражнения, кровь, другой биологический материал) собирают в стерильную посуду и обрабатывают антибиотиками, чтобы убить бактериальную микрофлору.

Культивирование на лабораторных животных

Обычно используют белых мышей, иногда морских свинок, хорьков, других.

Некоторые человеческие вирусы возможно культивировать только на человекообразных обезьянах. Способы заражения разнообразны и зависят от тропности (сродства) вирусов к каким-либо тканям. Например нейротропные вирусы лучше размножаются в нервной ткани, поэтому можно заразить интрацеребрально (в мозг).

Методы заражения и вскрытия проводят по всем общепринятым правилам, соблюдая все предосторожности. Работать с особо опасными вирусами можно только в специальных костюмах, в боксах (например с вирусами Эбола).

Культивирование на куриных эмбрионах.

С тех пор как обнаружили, что вирусы гриппа размножаются в куриных эмбрионах, этот метод стал широко применяться в вирусологии, так как прост в применении и не является дорогим.

Используют 7-9 дневные куриные эмбрионы (полный цикл развития 21 день).

Перед заражением поверхность обрабатывают спиртом, раствором йода, в скорлупе делают отверстие и заражают стерильным шприцем.

Способы заражения: в амниотическую полость, в аллантоисную полость или в желточный мешок. Вирусы размножаются на соответствующих оболочках, накапливаются в полостной жидкости, которую затем и можно собрать для дальнейшего исследования.

Эмбрионы культивируют при 37 град. 3 суток, затем снова обрабатывают скорлупу, вскрывают стерильными инструментами эмбрион и собирают вируссодержащую жидкость. Все работы по заражению и вскрытию производят в боксе.

Культивирование на культурах клеток.

Культуры клеток стали применять в вирусологии в последние десятилетия, это дало возможность культивировать и изучать гораздо более широкий спектр вирусов, так как не все человеческие вирусы возможно выделить на животных или на эмбрионах. Таким образом, современная вирусология пользуется клеточными культурами, которых получено в настоящее время огромное множество.