2018-01-21
523
Для этого надо знать:
1. После внесения вируса (заражения) в тканевую культуру он проникает в клетки, в которых интенсивно репродуцируется, повреждая клетки.
2. Репродукцию вирусов в культуре клеток можно обнаружить по следующим признакам:
а) цитопатическое действие (ЦПД) – наблюдаются морфологические изменения клеток (вакуолизация цитоплазмы, деструкция митохондрий, округление клеток), при этом часть из них погибает и отслаивается от поверхности стекла, в результате вместо сплошного клеточного монослоя остаются лишь отдельные клеточные островки; ЦПД обнаруживается микроскопически (´8) и служит не только для обнаружения, но и для идентификации вирусов, поскольку характер цитопатических изменений для разных вирусов неодинаков; например, вирус полиомиелита вызывает мелкозернистую деструкцию клеток; аденовирусы вызывают образование скоплений клеток в виде виноградных гроздьев; вирус кори вызывает образование симпластов – многоядерных клеток;
б) образование включений в клетках культуры – в ядре или цитоплазме образуются скопления вирусных частиц, имеющие различную форму и размеры (от 0,25 до 25 мкм); они могут быть выявлены в препаратах, приготовленных из ткани и окрашенных по Романовскому-Гимзе или флюорохромами;
|
|
|
в) способность к гемадсорбции – инфицированная культура клеток способна адсорбировать эритроциты, что хорошо видно под микроскопом; вирусы выходят на поверхность клеток, в которых они репродуцировались и связывают эритроциты, что позволяет судить о репродукции вирусов даже при отсутствии ЦПД; взвесь эритроцитов добавляют в культуру и после некоторого контакта промывают физиологическим раствором; на поверхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты в виде разнообразных фигур;
г) реакция гемагглютинации – скучивание эритроцитов кур, гусей, морских свинок под влиянием вирусов, содержащих в своей оболочке гемагглютинин (см. выше); их обнаруживают в культуральной жидкости клеточной культуры;
д) "цветная" реакция – клетки выращиваются на среде с индикатором (метиленовым красным), который изменяет цвет (с красного на желтый) под влиянием кислых продуктов метаболизма при росте незараженных клеток; при репродукции вируса нарушается нормальный метаболизм, рН не сдвигается и сохраняется первичный (красный) цвет среды.
