Аудиторная самостоятельная работа

Задание 1. Определение глюкозы в сыворотке крови глюкозооксидазным методом.

Следует помнить, что концентрация глюкозы в артериальной крови выше, чем в венозной. Ее определение в крови без добавления ингибиторов гликолиза следует провести в течение 2ч (не более) с момента получения образца.

Принцип метода. Глюкоза в присутствии глюкозооксидазы окисляется кислородом воздуха до глюкуроновой кислоты и перекиси водорода. Последний при наличии пероксидазы вступают в реакцию с фенолом и 4-аминофеназоном с образованием хинонимина красно-фиолетового цвета, интенсивность которого определяют фотометрично.

Оборудование: КФК-3, центрифуга, водяная баня, термостат, пипетки 1,0; 0,5 и 2,0 мл, микропипетки, пробирки.

Реактивы:

1) раствор ферментов (пероксидаза), Ч, ХЧ;

2) фосфатный буферный раствор (рН 7,4), ЧДА;

3) калибровочный (стандартный) раствор глюкозы (содержание глюкозы−10,0 ммоль/л), ЧДА.

Приготовление рабочего раствора. В колбу емкостью 200 мл перенести содержимое флакона с буферным раствором, добавить 100-120 мл дистиллированной воды, растворить фермент и довести до метки дистиллированной водой.

Ход определения: проводят по схеме табл. 1.

Содержимое пробирок перемешивают и выдерживают 20 минут при комнатной температуре 20⁰С или в термостате 15 минут при 37⁰С. После этого измеряют оптическую плотность смеси при 500-540 нм относительно контроля. Расчет концентрации глюкозы проводят по формуле:

С=Е х С_ст/ Е_ст, где

С− концентрация глюкозы, ммоль/;

Е и Е_ст− оптическая плотность опытной и стандартной проб;

С_ст− концентрация глюкозы в стандарте (10 ммоль).

Таблица 2

Содержание глюкозы в крови здоровых животных

(по В.И.Левченко,2004)

Научно-исследовательская работа студентов

Подготовить реферат по теме: «Нарушение регуляции обмена углеводов в организме и методы их диагностики».