2020-05-12
80
Китайский Центр по контролю и профилактике заболеваний
Настоящее Техническое руководство разработано для руководства учреждений по борьбе с болезнями и соответствующих учреждений на всех уровнях для проведения лабораторных испытаний нового коронавируса 2019 года (2019-nCoV).
Отбор проб/образцов
Цель
Цели отбора включают в себя следующее: подозреваемые случаи, кластерные случаи и другие случаи, требующие диагностики или дифференциальной диагностики на 2019 nCoV; или другие экологические или биологические вещества, которые требуют дальнейшего скрининга и тестирования.
Требования к отбору
1. Образцы для испытаний 2019- nCoV должны быть отобраны квалифицированными специалистами, прошедшими обучение по биобезопасности и обладающими соответствующими лабораторными навыками. Требования к средствам индивидуальной защиты (СИЗ) для персонала по отбору проб: маски или маски N95 с более высокой эффективностью фильтрации, защитные очки, защитная одежда, латексные перчатки с двумя слоями и водонепроницаемые чехлы для ботинок; при воздействии крови пациента, жидкостей организма, выделений наружный слой латексных перчаток следует своевременно менять.
2. Образцы у пациентов, находящихся в стационарах забираются медицинским персоналом больницы, где они проходят лечение.
3. Образцы у близкого окружения должны быть собраны назначенными местными медицинскими учреждениями.
4. В ходе заболевания может быть отобрано несколько образцов в зависимости от необходимости лабораторных исследований.
Виды отобранных проб
Отбор проб с дыхательных путей в острой фазе (включая отбор с верхних или нижних дыхательных путей) должны быть собраны в каждом случае; пробы с нижних дыхательных путей должны быть предпочтительными для сбора в тяжелых случаях. Отбор стула, крови, сыворотка, моча могут быть собраны в соответствии с клиническими потребностями.
Виды проб:
Отбор проб с верхних дыхательных путей: включает мазки из носоглотки, мазки из глотки и т. д.
Отбор проб с нижних дыхательных путей: включает мокроту, жидкости альвеолярного лаважа, жидкость бронхиального лаважа и экстракты дыхательных путей.
Фекалии/ анальные мазки: количество фекалий около 10 г или анальный мазок.
Взятие крови: необходимо собрать как можно больше крови в острой фазе в течение 7 дней после начала заболевания. Для каждого отбора требуется 5 мл крови. Вакуумные трубки, содержащие антикоагулянт ЭДТА, рекомендуются при взятии крови.
Образцы сыворотки: как при острой фазе болезни, так и при выздоровлении следует собирать как можно чаще. Первый образец сыворотки должен быть собран как можно скорее (предпочтительно в течение 7 дней после начала заболевания), а второй образец должен быть собран в течение 3 или 4 недель после начала заболевания. 5 мл крови требуется для каждого образца. Рекомендуется делать отбор в вакуумные пробирки без антикоагулянта. Сыворотка в основном используются для измерения антител, а не для анализа нуклеиновых кислот.
Моча: Соберите 2-3 мл утренней пробы мочи.
Методы отбора проб и обработка
Носоглоточный мазок: Человек производящий отбор осторожно удерживает голову одной рукой, другой вставляет тампон через ноздрю, медленно проникает глубоко по дну нижнего носового канала. Поскольку носовой канал изогнут, не прилагайте чрезмерных усилий, чтобы избежать травматического кровотечения. Когда кончик тампона достигает задней стенки полости носоглотки, осторожно поверните один раз (приостановитесь в случае рефлекторного кашля), затем медленно удалите тампон и окуните кончик тампона в пробирку, содержащую 2-3 мл раствора для консервации вируса (или изотоническим солевым раствором, раствором для тканевых культур или фосфатным буфером), выбросьте хвост и закройте крышку.
Глоточный мазок: Пациент сначала полощет горло нормальным физиологическим раствором, затем человек производящий отбор погружает тампоны в стерильный физиологический раствор (раствор для консервации вируса не допускается), слегка поднимает голову пациента с широко открытым ртом, пациент издает звук «ах», чтобы обнажить боковые глоточные миндалины, человек производящий отбор вставляет палочку с тампоном на корень языка, протирает с обеих сторон по 3 раза глоточные миндалины незначительно надавливая, затем протереть верхнюю и нижнюю стенки глотки тоже по крайней мере 3 раза и опускает тампоны в пробирку, содержащую 2-3 мл раствора для хранения (или изотонического солевого раствора, раствора для тканевых культур или фосфатного буферного раствора) и закрывает крышку. Глоточные тампоны могут быть помещены вместе с носоглоточными тампонами.
Экстракт из носоглотки или дыхательных путей: извлеките слизь из носоглотки или выделения из трахеи с помощью коллектора, соединенного с насосом отрицательного давления; вставьте головку коллектора в полость носа или трахею, включите отрицательное давление, поверните и медленно извлеките головку коллектора, соберите извлеченную слизь и промойте коллектор 3 мл раствора для отбора проб (педиатрический катетер, подключенный к шприцу на 50 мл, может использоваться как альтернатива коллектору).
Глубокий кашель с мокротой: Попросите человека покашлять и соберите мокроту в пластиковую пробирку с завинчивающейся крышкой, содержащую 3 мл раствора для отбора проб. Если отбор мокроты происходит не в специальный раствор, то перед тестированием его можно добавить в пробирку в количестве 2-3 мл или добавить реагенты для расщепления мокроты (Таблица 1) равного объема с мокротой.
ТАБЛИЦА 1. Формула жидкости для хранения реагентов для расщепления мокроты
Формула жидкости для хранения реагентов
для расщепления мокроты
| Ингредиенты | Масса / объем |
| Дитиотреитол | 0.1 g |
| Хлорид натрия | 0.78 g |
| Фосфор хлористый | 0.02 g |
| Динатрия гидрофосфат | 0.112 g |
| Дигидрофосфат калия | 0.02 g |
| Вода | 7,5 mL |
| pH 7.4±0.2 (26 *C) |
Перед использованием разбавьте раствор для хранения до 50 мл деионизированной водой. Мокрота также может быть сжижена с помощью фосфатного буфера, содержащего 1 г / л протеазы К в равном объеме мокроты.
Бронхиальный лаваж: Вставьте головку коллектора в трахею (глубиной около 30 см) введите 5 мл физиологического раствора, включите отрицательное давление, поверните головку коллектора и медленно его удалите. Соберите извлеченную слизь и промойте коллектор один раз раствором для отбора проб (педиатрический катетер, подключенный к шприцу на 50 мл, можно использовать в качестве альтернативы коллектору). Метод отбора проб зависит от больницы.
Альвеолярный лаваж: После местной анестезии вставьте бронхоскоп через рот или нос, пропустите через глотку в ветвь правой средней доли или нижнийязычковыйсегмент левого легкого и вставьте наконечник в отверстие бронхиальной ветви; медленно добавьте стерильный физиологический раствор через отверстие для биопсии в бронхоскопе по 30-50 мл физиологического раствора, всего 100-250 мл, максимум 300 мл. Метод отбора проб зависит от больницы.
Фекалии: Возьмите 1 мл раствора для отбора проб (таблица 2), возьмите маленький размер фекалий размером с сою и добавьте его в пробирку, выдержите при комнатной температуре 10 минут, центрифугируйте при 8000 об / мин в течение 5 минут и абсорбируйте супернатант для исследования.
ТАБЛИЦА 2. Формула раствора для исследования фекальных масс.
TABLE 2. Формула раствора для исследования фекальных масс
| Ингредиенты | Масса / объем |
| Трис | 1.211 g |
| Хлорид натрия | 8.5 g |
| Хлорид кальция безводный или хлорид кальция, содержащий кристаллическую воду | 1.1 g or 1.47g |
| Деионизированная вода | 800 mL |
| РН доводят до 7,5 концентрированной соляной кислотой и пополняют деионизированной водой до 1000 мл. | |
Раствор для обработки проб фекалий может быть приготовлен в лаборатории самостоятельно.
Суспензии стула также могут быть приготовлены с использованием раствора Хэнка или другого изотонического солевого раствора, раствора для тканевой культуры или фосфатного буферного раствора. Если у пациента наблюдаются симптомы диареи, соберите 3-5 мл и осторожно перемешайте, центрифугируйте при 8 000 об / мин в течение 5 минут и абсорбируйте супернатант для исследования.
Анальный мазок. Аккуратно вставьте дезинфицирующий ватный тампон в задний проход на глубину 3-5 см, затем осторожно поверните и вытащите, сразу же поместите тампон в пробирку с завинчивающейся крышкой, содержащую 3-5 мл раствора для консервации вируса и закройте крышку пробирки.
Кровь: Для сбора 5 мл образцов крови рекомендуется использовать вакуумные пробирки, содержащие антикоагулянт ЭДТА. Экстракцию нуклеиновой кислоты следует проводить на цельной крови или плазме в соответствии с типом выбранного реагента для экстракции нуклеиновой кислоты. Для разделения плазмы цельная кровь должна быть центрифугирована при 1500-2000 об / мин в течение 10 минут, и супернатант следует собирать в стерильную пластиковую пробирку с завинчивающейся крышкой.
Сыворотка: Взять 5 мл крови с помощью вакуумной пробирки. Оставьте при комнатной температуре в течение 30 минут, центрифугируйте его при 1500-2000 об / мин в течение 10 минут и соберите сыворотку в стерильную пластиковую пробирку с завинчивающейся крышкой.
Другие материалы: Собираются стандартным образом в соответствии с требованиями.
Упаковка проб
Собранные пробы должны быть упакованы отдельно в шкаф биобезопасности лаборатории BSL-2.
1. Все пробы должны быть помещены в воздухонепроницаемую морозостойкую пробирку для сбора образцов соответствующего размера с винтовой крышкой и прокладкой внутри. Номер образца, категория, название и дата отбора должны быть указаны на внешней стороне контейнера.
2. Пробы, хранящиеся в воздухонепроницаемом контейнере, должны быть запечатаны в пластиковый пакет соответствующего размера, причем каждый мешок содержит один образец. Требования к упаковке образца должны соответствовать соответствующим стандартам Тechnical Regulations for the Safe Transport of Dangerous Goods by Air / Технический регламент по безопасной перевозке опасных грузов по воздуху.
3. Перед транспортировкой внешние образцы должны подвергаться трехслойной упаковке, применимой к инфекционным веществам категории А и категории В, в зависимости от категорий образцов.
Хранение проб
Пробы для выделения вируса и обнаружения нуклеиновых кислот должны быть исследованы как можно скорее. Образцы, подлежащие испытанию в течение 24 часов, можно хранить при 4 ° C; Те, которые не могут быть проверены в течение 24 часов, должны храниться при температуре -70 ° C или ниже (образцы могут временно храниться в холодильниках -20 ° C при отсутствии условий хранения -70 ° C). Сыворотка может храниться при 4 ° С в течение 3 дней, а при температуре ниже -20 ° С в течение более длительного периода. Специальный склад или шкаф требуется для хранения образцов отдельно. Следует избегать повторяющихся циклов замораживания-оттаивания во время транспортировки образца.
