Первичная идентификация

Для этой цели применяют, как указывалось, комбинированные среды - Олькеницкого или Клиглера, на которых наряду с получением культуры для дальнейшего изучения выявляют одновременно несколько ее признаков: способность образовывать сероводород и отношение к глюкозе, лактозе (а также сахарозе и мочевине - на среде Олькеницкого). Посев материала из колонии на комбинированную среду проводят бактериологической петлей вначале по скошенной части штрихом и заканчивают уколом в толщу агарового столбика, не достигая дна пробирки. Посевы инкубируют при 37°C в течение 18-20 часов, а при целенаправленных исследованиях на иерсинии в течение того же времени, но при 22° - 25°C.

О ферментации лактозы (и сахарозы) в среде Олькеницкого и ферментации лактозы в среде Клиглера судят по появлению желтой окраски в скошенной части агара, а о ферментации глюкозы - по такому же окрашиванию в столбике. Газообразование устанавливают по появлению пузырьков, разрывам агара или его отслоению от стенок пробирки. Образование сероводорода устанавливают по почернению среды обычно в средней части столбика, при значительной продукции  можно наблюдать почернение всей среды. В среде Олькеницкого при росте культуры, гидролизующей мочевину, происходит подщелачивание, вследствие чего среда приобретает диффузный яркий красно-малиновый цвет. В этом случае учет ферментации углеводов невозможен. При интенсивном образовании сероводорода, когда чернеет целиком вся среда, учет ферментации углеводов в средах Клиглера и Олькеницкого затруднен. Однако следует помнить, что образование сероводорода может происходить лишь в кислой среде, которая создается за счет ферментации глюкозы, присущей всем энтеробактериям. Кроме того, при просмотре среды в проходящем свете в столбике обычно видны на общем черном фоне участки пожелтевшего агара, свидетельствующие о ферментации углеводов.

По совокупности биохимических свойств, выявленных на комбинированной среде, делают предположительное заключение о возможной родовой принадлежности культуры. Далее выбирают дифференциально-диагностические тесты, необходимые для установления рода энтеробактерий, т.е. проводят дифференциацию родов (табл. 5). Для эшерихий, эдвардсиелл, гафний и серраций это совпадает с определением вида.

Таблица 5. Первичная идентификация энтеробактерий по биохимическим реакциям в комбинированной среде и выбор тестов для установления родовой принадлежности*

Примечание

Условные обозначения: "+" - положительная реакция, указывающая на ферментацию лактозы и (или) сахарозы, образование сероводорода, гидролиз мочевины; "-" - отрицательная реакция по тем же тестам; "к" - ферментация глюкозы без газообразования; "кг" - ферментация глюкозы с газообразованием; "." - учет реакции невозможен.

______________________________

* Сведения по роду Erwinia не включены, так как при обычном (37°C) культивировании посевов на пластинчатых средах указанные энтеробактерии не растут или дают замедленный скудный рост.

** При использовании среды Олькеницкого.

*** При использовании среды Клиглера проводят параллельный посев в среду с мочевиной (по Преусу или по Кристенсену).

В связи с тем, что набор определяемых с помощью комбинированных сред биохимических признаков не является достаточным для установления рода энтеробактерий, серологическую идентификацию исследуемой культуры на данном этапе не проводят, кроме постановки серологических проб с поливалентными сыворотками к сальмонеллам и шигеллам, помогающих выбору биохимических тестов для дальнейшей идентификации. Исключение возможно при чрезвычайных эпидемических ситуациях, при этом к серологическому исследованию культуры приступают после проведения пересевов с этой среды на необходимые среды минимального дифференцирующего ряда, а полученные результаты серологической идентификации рассматривают как сугубо ориентировочные, требующие подтверждения на этапе завершенной биохимической идентификации.

При возникновении сомнений в принадлежности изучаемой культуры к семейству Enterobacteriaceae (см. табл. 5) следует использовать тесты, позволяющие дифференцировать энтеробактерии от других грамотрицательных микроорганизмов. В числе этих тестов: изучение морфологических (палочка, кокк) и тинкториальных свойств микроорганизмов путем микроскопии мазков, окрашенных по Граму (+ или -); OF-тест, т.е. тип утилизации глюкозы - окисление (O), ферментация (F) или отсутствие активности (-); определение таких ферментов, как цитохромоксидаза, нитратредуктаза (редукция нитратов в нитриты), см. табл. 6.