Искусств питат среды, требования. Дифф-диагн среды. Состав сред Эндо и Плоскирева

По составу:

1) синтетич – содержат только хим соедин-я в установленных дозировках;

2) натуральные – состоят из продуктов жив и растит происх-я, имеют неопредел хим/состав;

3) простые – пептонная вода, питат бульон, МПА, питат желатин;

4) сложные – на основе простых: сах бульон, мясо-пептонный кровяной агар.

Также по составу делят на белковые, безбелковые и минеральные.

По происх-ю: искусственные - жив (МПА,МПБ) и растит (настои сена, соломы, отвары дрожжей, фруктов, пивное сусло);  естественные (природные).

По назнач-ю: универсальные и специальные (элективные; диффер-диагностич; обогащения; консервир-е).

По консист-и: жидкие; полужидкие (агара 0.2-0.7%); плотные (агара 1.5-2%).

Есть также микро-тест-системы – для обеспеч-я микрообъёмной технологии б/х идентиф-и микробов.

Среда Эндо - агар, лактоза, основной фуксин, Na₂SO₃. Селективно-дифференц среда для киш/палочки. На среде Эндо лактоза(+) эшерихии образуют красные колонии с металлич блеском, лактоза(-) – бледно-розовые или бесцветные с темным центром.

Среда Плоскирева – МПА, гипосульфит, нейтр/красный, бриллиант зеленый, йод, лактоза, NaCl, сода.

Дифф-диагностич среды – Хисса, Кларка. Применяют для изуч-я и идентиф-и отдельных типов, видов, групп бактерий. Выделяют среды с углеводами и спиртами, с мочевиной, для опред-я индолообраз-я, протеолитич активности, комбинированные. В среды часто вносят индикаторы. Среды делят на 4 группы: содержащие белки (опред-е гемолитич и протеолитич св-в), содержащие углеводы или спирты (сдвиг ph, измен-е окраски среды, образ-е газа), для опред-я редуцирующей способ-ти (среды с обесцвеч красками и среды с нитратами для опред-я денитрифицирующей активности), среды для определ групп бактерий (цитратные).

Питание микробов, типы. Источники С, N, энергии. Мех-м питания, диффузия, облегченная диффузия, активный транспорт. Пермеазные системы, состав, этапы активного транспорта.

Бактерии – голофиты (утилиз-ют питат в-ва в виде простых молекул из водных р-ров). Бактериям присущ также голозойный тип питания – могут утилиз-ть тверд/пищу с помощью внеш/питания. Для этого они имеют мощный ферментат потенциал. Образ-ся низкомолекул продукты, проникающие через клет/стенку.

Источники С – углеводы, аминок-ты. Аутотрофы в качестве источника С утилизируют СО₂ или карбонаты, гетеротрофы – используют углеродсодерж соед-я. Источники азота - органические (аминогетеротрофы) и неорганич соед-я (аминоаутотрофы). Получ-е энергии – фотосинтез, окисление хим соед-й, субстратное фосфорилир-е (брожение), окислит фосфорил-е (аэробы, анаэробы).

Мех-м поступл-я питат в-в в клетку – ЦПМ осущ-ет транспорт питат в-в и выход из клетки продуктов метаболизма. Питат в-ва проникают в клетку:

1) путём пассивной диффузии – без энергозатрат, по градиенту конц-и - вода, О₂, СО₂, N₂;

2) путём облегч диффузии - без энергозатрат, протекает при участии мембр/белков – транслоказ, пермеаз (глицерин у киш/палочки);

3) путём акт транспорта – с энергозатратами, против градиента конц-и, при участии белков (глюкоза);

4) путём транслокации хим групп – в процессе переноса происходит хим модиф-я питат в-ва (углеводы фосфорилируются), выход из клетки невозможен.

Выход в-в из клетки:

1) фосфотрансферазная р-я – происходит при фосфорилиров-и переносимой молекулы;

2) котрансляционная секреция – имеется особая последоват-ть аминок-т, чтобы прикрепиться к мембране и сформировать канал, через кот-й выходят молекулы белка; так выходят из клетки токсины столбняка, дифтерии;

3) почкование мембраны.

Пермеазные системы –пример акт/транспорта. Энергия использ-ся для ↓ сродства пермеазы к в-ву на внутр стороне ЦПМ по сравнению с её сродством к тому же в-ву на внешней. В рез-те скорость выхода в-ва наружу станов-ся <, чем скорость его поступления внутрь клетки, и конц-я в-ва в клетке ↑.

16. Дыхание микробов, аэробы и анаэробы, получение энергии. Облигатные и факультат анаэробы. Причины чувствит-ти анаэробов к О₂. Методы культив-я анаэробов.

Большинство прокариот получают энергию путём дегидрогениров-я. Аэробы – энергию для жизнедеят-ти получают в рез-те окислит/процессов с участием своб О₂. Анаэробы – получают энергию без доступа О₂, путём ускор расщепл-я питат в-в. Облигатные (строгие) анаэробы развив-ся без доступа О₂ (клостридии). Факультат (условные) анаэробы могут развиваться и в присутствии О₂ (киш/палочка, инфузории). Аэротолерантные бактерии – могут расти в присутствии О₂, но не использовать его в качестве источника энергии; энергию получают с помощью брожения. Микроаэрофилы – нужд-ся в О₂ для получ-я энергии, но лучше растут при ↑ СО₂ (капнофильные).

Аэробное дыхание – в р-ях окисления в-в конечным акцептором электронов служит молекулярный О₂, он переходит в ион О^2- и при взаимод-и с протонами образует воду.

Анаэробное дыхание – конечными акцепторами электронов выступают соед-я, содержащие связ О₂ (нитраты, нитриты, сульфаты, карбонаты, сера, железо).

Причины чувствит-ти анаэробов к молекул О₂ воздуха - при попадании О₂ на среду, в кот-й культив-ся облигатный анаэроб, наруш-ся дых/цепь анаэроба. При взаимод-и субстрата с О₂ водород соед-ся с О₂ и образ-ся Н₂О₂. У аэробов есть фермент каталаза, кот-я расщепляет Н₂О₂. У анаэробов этого фермента нет, что приводит к накоплению Н₂О₂, задержке роста клеток и их гибели.

Методы культив-я анаэробов:

Стационарн способ – применяют чаще. Состав сред постоянный, манипуляций с ними не проводят.

Способ глубинного культив-я – при промышл выращ-и бактер/биомассы. Используют спец котлы-реакторы, снабжены системами поддерж-я t, подачи питат в-в, перемешивания, подачи О₂. Создание аэробных условий по всей толще среды способ-ет протеканию энергопроцессов по аэробному пути, приводит к максим выходу биомассы.

Метод проточных сред – промышленный. Бактер/культуру поддерж-ют в экспоненциальной фазе роста, что достигают постоянным внесением питат в-в и удал-ем определ числа бактер/клеток. Обеспеч-ся максим выход биологич-активных в-в (витамины, антибиотики).