Диагностическая стратегия и тактика в эпизоотологии. Диагностика инфекционных болезней. Идентификация возбудителей и их индикация в объектах ветнадзора

Значение и место диагностики в системе ППМ. Диагностика - «глаза и уши» эпизоотологии. Исторические аспекты отечественной ветеринарной диагностики.

Основные направления в диагностике инфекций:

· клинико-эпизоотологический анализ;

· макро- и микроскопическое исследование инфицированных тканей с целью выявления специфических поражений;

· микробиологические приемы выделения и идентификации возбудителей;

· серологические тесты для определения специфических антител или выявление динамики их нарастания.

Диагностические ситуации в эпизоотологии:

Определение:	Общая стратегия:
· благополучные	· эпизоотологический мониторинг;
· угрожаемые, предъэпизоотические	· клиническое наблюдение, · контроль факторов и групп риска, · серологическая разведка, · животные-сентинел в системе эпизоотологического мониторинга и надзора;
· неблагополучные, эпизоотические	· клиническая и эпизоотологическая диагностика, · патоморфологические исследования, · изоляция и идентификация возбудителя в системе эпизоотологического надзора и контроля;
· постэпизоотические	· характеристика постинфекционных изменений, · анамнез клинический и эпизоотологический, · патогномонические и постморбидные признаки, · постинфекционный иммунитет (IgM, IgG) в системе эпизоотологического мониторинга и надзора.

Методологические принципы диагностики инфекционных болезней:

Манифестная инфекция - острая, подострая, хроническая, ремиссии	· клинические и патогномонические признаки · прямая демонстрация возбудителя или его антигенов · изоляция возбудителя · его идентификация (микробиологическая, серологическая, генетическая)
Скрытая инфекция - латентная, персистентная, медленная	· демонстрация иммунного ответа - антигены и антитела (серологическая эпизоотология) · биохимические (гематологические) изменения · идентификация генома возбудителя (молекулярная эпизоотология)
Постинфекционные состояния	· клиническая история (анамнез) · патогномонические изменения · демонстрация иммунного ответа (антитела)

Методология:

· патогенетические аксиомы - ворота инфекции, локализация инфекционного процесса и динамика его развития, локализация и специфика поражений, локализация возбудителя, симптомы и трансмиссия, циркулирующие системы, типичные поражения, выделения, паренхиматозные органы;

· анализ ситуации и формулировка диагностических задач - выделение и идентификация возбудителя, тестирование антител, патоморфологические тесты, виды и типы специментов;

· алгоритмы решения. Общая схема:

Стадии:	Маркеры инфекции (выраженность):
инкубационный период	возбудитель (++)
генерализация инфекции	возбудитель (++++)
манифестная форма	возбудитель (+++), антигены (+++)
конвалесценция	антигены (++), IgM (++++)
ремиссии	антитела IgG, IgA (++++)

· множественное тестирование: параллельное, серийное (последовательное), ретестирование (негативного стада).

Общие требования к средствам и методам диагностики и их качественные характеристики:

· чувствительность (пропорция истинно положительных, «правильных» результатов) и специфичность (пропорция истинно отрицательных результатов);

· аутентичность, или соответствие - правильность выбора как теста, так и объекта);

· чистота, или точность - глубина, или уровень постановки диагноза по линии: симптом Þ этиология Þ идентификация возбудителя Þ нозология Þразновидность возбудителя. Например, мастит Þ инфекционный Þ бактериальный Þ стафилококковый, или трахеобронхит собак Þ инфекционный Þ аденовирус собак Þ 2 типа;

· разрешающая способность, или обоснованность (достаточность) - необходимая полнота методического спектра диагностики по линии: клиника и симптоматика Þ биохимия, гематология, патоморфология Þ микробиология Þ серология Þ геномный или полипептидный анализ. Например, репродуктивные расстройства у свиноматок Þ гибель и рассасывание эмбрионов, мумификация плодов и мертворождаемость Þ выявление антигенов парвовируса свиней с помощью МФА в тканях пораженных плодов Þ определение сероконверсии в парных сыворотках свиноматок в отношении ПВС, сравнение титров IgM и IgG, или массовый острый лихорадочный синдром и угнетение у свиней всех возрастов Þ экстенсивный геморрагический диатез на вскрытии Þ выделение вируса КЧС в культуре клеток с помощью МФА Þ окончательное подтверждение биопробой на животных, или прогрессирующее исхудание взрослого КРС Þ персистентный лимфоцитоз Þ РИД-позитивность на лейкоз;

· прецизионость (статистическая достоверность);

· воспроизводимость (повторяемость в чувствительности и специфичности);

· достоверность (надежность, испытанность);

· ценность, стоимость;

· репрезентативность выборки.

Семиотика (см. лекцию 7), патогномонические макро- и микроскопические признаки (на вскрытии и при патогистологическом исследовании):

· клиническое проявление инфекционных болезней;

· возбудитель и антигены в мазках-отпечатках, тельца-включения;

· дифференциальные таблицы (по клинической картине, макро- и микроизменениям).

Микробиологическая диагностика:

· прямое обнаружение возбудителя - светооптическая и электронная микроскопия, иммуноэлектронная микроскопия, экспресс-методы, общие свойства - бактериальный рост, фильтруемость, патогенность для лабораторных моделей;

· метод флюоресцирующих антител, другие хромогенные субстраты и метки (ферритин, коллоидное золото);

· выделение возбудителя на биообъектах - биопроба, экспериментальная инфекция, моделирование, признаки (куриные эмбрионы, культура клеток, лабораторные и естественно-восприимчивые животные);

· количественные аспекты и разрешающая способность методов, количественные тесты, титрование, выражение;

· идентификация - культуральные, биохимические, генетические свойства и признаки, таксономия возбудителя.

Серологическая диагностика:

· серологические реакции, методы серодиагностики, номенклатура, чувствительность и специфичность;

· качественные тесты с одним разведением сыворотки (РДП, РИД, РСК);

· тесты с серийными разведениями сыворотки (РН, РСК);

· тесты с прецизионными возможностями - иммуноферментный анализ и РНГА (количество), иммуноблотинг (качество, антигенный спектр антител);

· количественные измерения, выражение, тесты, разведения, логарифмическая трансформация (log₂), средние геометрические титры (СГТ);

· серотипизация и тесты.

Организационно-правовые основы:

· нормативно-техническая документация;

· силы и средства, уровни решения проблем (ветлаборатории, НИУ, прецизионные центры), ответственность;

· материально-техническое обеспечение (приборы, реактивы, биопрепараты, их разработчики и производители), стандартизация и сертификация.

Интерпретация результатов:

· статистическая обработка, количественное выражение и достоверность результатов;

· истинно положительный и отрицательный результаты, принципиальные различия их получения и реализации;

· ложно-положительные результаты и их причины - перекрестные реакции, неспецифические ингибиторы, неспецифическая агглютинация;

· ложно-отрицательные результаты и их причины - естественная или индуцированная толерантность и супрессия (например, вирусная диарея+лейкоз КРС в РИД), неверно выбранные время тестирования или сами тесты, неспецифические ингибиторы (антикомплементарность сыворотки, токсичность для субстратов, неполные или блокирующие антитела, недостаточная чувствительность тестов).

Целевые возможности диагностических направлений и отдельных методов в решении общих и частных эпизоотологических задач (см. выше). Место и уровни.

Дифференциальная диагностика и ее эпизоотологическое значение при инфекциях различных категорий.

Прецизионный анализ в диагностике инфекций. Цели, задачи, методы и уровни решений.

Проблема дифференциации постинфекционного и поствакцинального иммунитета.

Определение и принципы серологической эпизоотологии:

· серопозитивность, серонегативность, сероконверсия;

· аналитическая специфичность и титры - предельные возможности, обеспечение чистоты, или точности диагноза, выявление минимальных «следов» инфекции, как правило скрытой;

· диагностическая специфичность и титры - оптимальные расчетные (эмпирически) значения, коррелирующие с показателями других тестов (как правило клиническо-морфологических), подтверждение достоверности и достаточности диагноза.