Правила работы с культурами микроорганизмов

Микробиологическая лаборатория и правила работы в ней.

 

   Необходимо соблюдать в микробиологической лаборатории чистоту и порядок для обеспечения стерильности исследования и избежания загрязнения культур микроорганизмов. Ежедневно в ней проводить влажную уборку, дезинфекцию воздуха путем проветривания (30-60 минут) и облучение УФ лучами от 30 мин. Пол, стены и мебель протирают растворами различных дезинфицирующих веществ (2-3 % раствором соды, 3-5 % раствором фенола, 0.3 % водным раствором хлорамина).

   Нужно соблюдать следующие правила:

1) работу проводить в халатах и сменной обуви;

2) в лаборатории запрещается курение, прием пищи;

3) на рабочем месте не должно быть посторонних предметов; все реактивы, растворы, микробиологическая посуда с питательными средами и культурами должны быть подписаны;

4) все предметы должны быть обеззаражены, либо обжиганием, либо погружением в дезинфицирующем растворе;

5) в конце занятия нужно привести в порядок рабочее место.

 

Оборудование, посуда и инструменты для работы с культурами микроорганизмов.

   В микробиологической лаборатории используется следующее оборудование:

1) термостат;

2) качалки и ферментеры;

3) сушильные шкафы и автоклавы;

4) ламинарные бюксы;

5) качалочные колбы, конические колбы, чашки Петри, пробирки, матрацы – для культивирования мко;

6) петли, иглы, крючки, стеклянные пипетки, шпатели Дригальского – инструменты для посева.

 

Рис.№1. Посуда для культивирования микроорганизмов: 1- качалочная колба, 2- качалочная колба с отбойниками, 3 – коническая колба, 4 – чашка Петри, 5 – пробирки, 6 – матрац.

 

                                                                                       Рис. №2. 1 - бактериологическая петля, 2 – бактериологическая игла.

 

 

Подготовка посуды и материалов к стерилизации. Стерилизация посуды и материалов.

  В бактериологических и вирусологических лабораториях используют обычную лабораторную посуду: цилиндры, колбы, склянки для растворения и хранения реактивов, химические пробирки. Помимо этого используют специ­альную посуду:

Пробирки

• биологические- с крупным дном, неразвернутым краем;

• центрифужные- сужены книзу, конической формы;

• преципитацию иные- очень узкие с внутренним диаметром 2-3 мм       Стеклянные чашки Петри для выращивания микроорганизмов на плотных питательных средах. Их изготавливают из прозрачного стекла, не имеюще­го камней, пузырей. Высота чашки 20-30 мм, диаметр 60-200 мм

Пипетки

• градуированные должны соответствовать параметрам ГОСТа

• пастеровские- стеклянные трубки диаметром 5-7 мм, у которых один конец оттянут над пламенем горелки в виде капилляра

    Специальная лабораторная посуда должна быть чистой и стерильной. Мытье производят ершами с мылом и содой. Новую посуду следует до мытья прокипятить в 1-2% растворе хлористоводородной кислоты. Сушат посуду в су­шильном шкафу.

Сухую посуду закрывают и помещают в пеналы. В пробирки вставляют ватные пробки и заворачивают в пачки по 5-10 штук. К чашкам Петри подбирают крышки и завертывают по одной или несколько штук. Пипетки закрывают ваткой с того конца, который берут в руки. Готовые пипетки заворачивают в бумагу и укладывают в пеналы. Стерилизация проводится в сухожаровом шкафу при температуре 180°С в течение 1 часа.

 

Правила работы с культурами микроорганизмов.

    В лабораториях микроорганизмы выращивают на жидких и плотных питательных средах, которые разливают в пробирки, колбы, чашки Петри. Посуду и питательные среды предварительно стерилизуют. Процесс выращивания микроорганизмов в искусственных условиях в питательной среде называется культивированием. При этом выращенные клетки определенного вида мко называются культурой микроорганизмов.

     Все действия следуют проводить около пламени горелки и по возможности быстро, чтобы не загрязнить культуру посторонними культурами. Не рекомендуется делать резких движений и ходить около работающего с чистой культурой, т.к. движение воздуха увеличивает вероятность случайного загрязнения. Для розлива питательной среды в чашки Петри сосуд со средой берут в правую руку, вынимают из него пробку, зажимая ее мизинцем и безымянным пальцем левой руки. Затем обжигают горло сосуда в пламени горелки и, приоткрыв большим и указательным пальцами левой руки крышку чашки Петри, быстро наливают в чашку расплавленную среду в таком количестве (около 20 мл), чтобы дно чашки было полностью покрыто. Крышку тотчас закрывают и чашку оставляют на горизонтальной поверхности до тех пор, пока не застынет среда.

   Внесение клеток мко в стерильную среду называется посевом. Распределение мко по поверхности питательной среды нарывают рассевом. Перенос уже выращенных из одной среды в другую – пересевом. Клетки мко для посева или приготовления препаратов берут бактериологической петлей (если мко выращены на плотной среде) или стерильной пипеткой. Перед взятием клеток мко петлю стерилизуют, обжигая саму петлю и часть держателя в пламени горелки. Чтобы не повредить клетки мко петлю вначале охлаждают, прикасаясь ею к внутренней поверхности сосуда или к питательной среде, свободной от клеток мко, и только после этого захватывают небольшое количество микробной массы.