Учет результатов и идентификация

Инокуляция и инкубация

Методика проведения исследования

СТРЕПТОтеста 16

СТРЕПТОтест 16 предназначен для определения биохимичес­кой активности и идентификации стрептококков по 16 планшетным биохимическим тестам, расположенным в двухрядном вертикальном стрипе: гиппурат, фосфатаза, лейцинаминопептидаза, бета-глюкуронидаза, альфа-галактозидаза, эскулин, аргинин, уреаза, маннитол, сорбитол, трегалоза, лактоза, раффиноза, инулин, мелибиоза и рибоза. Идентификацию дополняют тестами на диагностических полос­ках: ПИРАтест для выявления пирролидонилариламидазы и ВПтест для выявления образования ацетоина. Набор содержит 10 пластин и позволяет провести идентификацию 60 культур.

Пластинки СТРЕПТОтест 16 (один двухрядный стрип на одну культуру), рамка пластинки с крышкой, суспензионная среда для СТРЕПТОтест 16, физиологический раствор, парафиновое масло, реактивы для тестов гиппурат, фосфатаза, диагностические полоски ПИРАтест и ВПтест (ацетоны), реактивы к тестам ПИР и ацетоин, стандарт мутности третьей степени по шкале МсFarland.

Выделение чистой культуры и приготовление бактериальной суспен­зии. Выделяют чистую культуру на кровяном агаре (с кровью ба­рана). Инкубацию чашек производят в атмосфере с содержанием 5% СО₂. Учитывают морфологию культуры, проверяют каталазную активность на предметном стекле с 3% перекисью водорода, гемоли­тическую активность на кровяном агаре, ставят ПИРАтест. Из чис­той 24-часовой культуры стрептококков готовят в физиологическом растворе бактериальную суспензию мутностью, соответствующей указанной выше. Для приготовления суспензии удобно использовать ватные тампоны для снятия колоний с питательной среды.

Подготовленную суспензию после тщательного встряхивания инокулируют по 0,1 мл во все 8 лунок первого ряда стрипа (лунки Н-А, тесты с НIР по URЕ). В ампулу с 1 мл суспензионной среды добавляют 1 мл исходной суспензии, встряхивают и инокулируют разведенную суспензию в 8 лунок второго ряда стрипа (лунки Н-А, тесты с МАN по RIВ). После инокуляции в лунки В и А первого ряда (тесты АRG и URЕ) добавляют по две капли парафинового масла. В пробирку с исходной суспензией (объем 1 мл) помещают полоску с ВПтестом. Пластинку СТРЕПТОтест 16 и пробирку с ВПтестом инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 и 2 часов соответс­твенно.

После 2 часов инкубации в пробирку с ВПтестом добавляют по три капли реактивов ВПТ1 и ВПТ2, пробирку встряхивают и дополнительно инкубируют при 37 °С в течение 30-40 минут, после чего учитывают результат ВПреакции.

После 24 часов инкубации добавляют реактивы в следующие лунки пластинки: ряд 1-й, лунка Н (тест гиппурат) - две капли реак­тива на гиппурат; лунка G (тест фосфатаза) - одну каплю реактива на фосфатазу. Инкубируют пластинку 5-10 минут при комнатной температуре для лучшего проявления цветовых реакций и учитывают результаты всех тестов. Тест HIР учитывают не позднее 10 минут пос­ле добавления реактива, так как по истечении этого времени могут проявиться ложноположительные реакции. Чтение тестов LАР, GLR и GАL проводят на белом фоне.

При оценке СТРЕПТОтеста 16 ориентируются по таблице «Интерпретация реакций», цветной шкале сравнения и/или цветным реакциям контрольных штаммов.