Стимулирующая ростовая добавка для выращивания B.nodosus
а) Раствор гемина: 50 мг гемина растворяют в 1 мл I N NaOH, добавля
ют 100 мл воды, автоклавируют при 121° С 15 минут.
б) Раствор витамина К (менадион): 100 мг менадиона растворяют в
20 мл 95%-ного этанола и стерилизуют фильтрацией.
в) смешивают 1 мл менадиона и 100 мл гемина. К 100 мл питательной
среды добавляют 1 мл смеси.
г) В питательную среду вносят 0,5% дрожжевого экстракта.
Питательная среда с селективными свойствами.
Базовая среда Brucella-агар, селективные добавки: канамицин —75 мкг/ мл, ванкомицин — 75 мкг/мл.
Плотная среда в модификации Бектимирова. Тщательно очищенные от волосяного покрова голяшки овец вместе с роговым башмаком копытец заливают водопроводной водой и варят в закрытой кастрюле 2-3 часа до отделения тканей от костей. Полученный бульон фильтруют через бельтинг-ткань или ватно-марлевый фильтр. Добавляют 0,5% пептона, 0,5% хлорида натрия и 2% агара. Кипятят до полного растворения агара, устанавливают рН 7,6 и стерилизуют при 120° С 30 минут. В расплавленную и остуженную до 45-50° С среду вносят асептически 0,05% солянокислого цистеина (в виде 2%-ного раствора), 20% среды № 199,20%о дефибринированной крови лошади. Посевы инкубируют в атмосфере углекислого газа.
Жидкая среда в модификации Бектимирова. Смешивают 650 мл бульона из голяшек овцы и 300 мл экстракта головного мозга, добавляют 10 г пептона, 50 мл экстракта копытного рога, 5 г хлорида натрия. Стерилизуют при 120° С 30 минут и разливают по пробиркам. Культивирование проводят в анаэростате в течение 24 ч.
Приготовление экстракта из головного мозга. Головной мозг овцы или крупного рогатого скота заворачивают в марлю, заливают водой и кипятят 15-20 минут, после чего выжимают и растирают в небольшом количестве мясо-пептонного печеночного бульона (МППБ) до получения кашицеобразной массы. Полученную массу суспендируют в МППБ в соотношении 1:9 и автоклавируют при 120° С 30 минут. Отстоявшуюся после автоклавирования смесь центрифугируют, надосадочную жидкость стерилизуют через фильтр Зейтца и хранят при 4° С.
Приготовление экстракта копытного рога. Копытный рог овцы высушивают и тонко измельчают до получения порошка, смешивают
1 часть порошка и 9 частей 0,8%-ного раствора хлорида натрия. К полученной смеси добавляют 20% трипсина и инкубируют в течение 2-3 суток при 37° С, поддерживая рН 7,5-7,8. Смесь нагревают до 60° С, после чего фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют через фильтр Зейтца.
Дизентерия свиней — инфекционная болезнь, характеризующаяся геморрагическим поносом и некротическим поражением толстых кишок. Восприимчивы свиньи всех возрастов, но чаще молодняк 1-6-месячного возраста. Возбудитель — анаэробная, грамотрицательная, извитая бактерия Serpulina hyodysenteriae (ранее Treponema hyodysenteriae), относится к роду Serpulina, семейству Spirochaetaceae. Род Serpulina содержит два вида, один из которых, S. innocens, не является патогенным для свиней, обнаруживается в фекалиях здоровых Свиней и собак. Существуют данные, что S. hyodysenteriae проявляет спои патогенные свойства, только будучи в ассоциации с некоторыми другими представителями кишечной микрофлоры. Лабораторная диагностика дизентерии свиней основана на обнаружении возбудителя в исследуемом материале методом микроскопии, с помощью иммунологических реакций, а также на выделении и идентификации культуры возбудителя.