Красители, применяемые для бактериологических исследований, относятся к группе так называемых анилиновых. Они разделяются на «основные» и «кислые». Термины «кислые» и «основные» только определяют сродство краски к определенной части клетки. Основными красками хорошо окрашиваются ядерный хроматин и микробы. Кислые краски окрашивают микробов слабее, при окраске же тканей они окрашивают протоплазму клеток. Наиболее употребительны следующие краски: метиленовый синий, тионин (синие краски), основной фуксин, сафранин и эозин (красные), бисмарк-браун, или везувин (коричневая), метилгрюн (зеленая), метилвиолет, генцианвиолет, кристаллвиолет (фиолетовые). Из них только эозин – кислая краска; она употребляется для некоторых специальных целей. Все эти краски продаются в виде аморфных или кристаллических порошков, из которых готовят красящие растворы.
Приготовление красящих растворов. Исходным материалом почти для всех необходимых рабочих красок являются насыщенные спиртовые растворы, которые следует иметь в запасе и сохранять в склянках с притертыми пробками. Насыщенные спиртовые растворы готовят следующим образом: 10 г сухой краски насыпают во флакон с притертой пробкой, наливают 100 мл 96º спирта (ректификата) и дают настояться в течение нескольких дней, каждый день, взбалтывая раствор. Из таких насыщенных растворов готовят спиртово-водные растворы, пригодные для окраски микробов. Наиболее часто употребляются следующие растворы:
Карболовый фуксин (фуксин Циля)
10 мл насыщенного спиртового раствора фуксина
90 мл 5% карболовой кислоты
Разведенный фуксин
10 мл карболового фуксина
90 мл дистиллированной воды
Щелочной метиленовый синий
30 мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего
100 мл дистиллированной воды
1мл 1% раствора щелочи
Карболовый генцианвиолет
10 мл насыщенного спиртового раствора генцианвиолета
90 мг 5% карболовой кислоты.
Растворы генцианвиолета дают осадок при окрашивании. Вместо генцианвиолета можно пользоваться насыщенными спиртовыми растворами метиленвиолета или кристаллвиолета. Растворы карболовой кислоты можно брать 1%, а не 5%. Кроме того, для окраски по Граму можно пользоваться 0,25% водным раствором метиленвиолета или кристаллвиолета без карболовой кислоты. Раствор стоек и осадка не дает.
По методу Синева вместо раствора генцианвиолета применяют кусочки фильтровальной бумаги, предварительно пропитанной спиртовым раствором краски и затем высушенные. Для этого листы фильтровальной бумаги погружают на 1-2 минуты в 1-2% раствор краски в 96º спирте, бумагу высушивают и разрезают на кусочки величиной 2´4 см. Такие бумажки сохраняются в банках с притертой пробкой неограниченное время.