Определение сальмонелл и шигелл

1. Метод коагуляции и центрифугирования по Фикеру. Для исследования берут 30-50 г почвы. Посевы почвы производят из основного разведения 1:10 в стерильной водопроводной воде. С целью концентрации сальмонелл к 500 мл взвеси почвенной суспензии добавляют 2 мл 10% стерильного раствора бикарбоната натрия, а затем 1,7 мл 10% стерильного раствора сульфата окиси железа – (Fe₂SO₄)₃. После размешивания суспензию оставляют на 1 час при 4 ºС. Образовавшиеся после коагуляции хлопья вместе с частицами почвы и бактериями оседают на дно. Осадок центрифугируют 5мин. и растворяют в 25% стерильном растворе виннокаменнокислого калия, прибавляя его по каплям до растворения осадка. После чего осадок высевают по 0,5-1мл на плотные элективные среды Вильсона-Блер и Плоскирева с помощью стерильного шпателя. Этим же шпателем заражают еще 3-4 чашки. Оставшийся осадок заливают 50мл. 10-20 % желчного бульона, при 37 ºС инкубируют 5-6 часов и производят ранний высев петлей на плотные элективные среды, а через 8-20 часов дополнительный высев. Дальнейшая идентификация сальмонелл и шигелл производится по общепринятой методике.

2. Применение магниевой среды “М” для обнаружения сальмонелл в почве.

В подготовленную суспензию почвы вносят растворы и навески магниевой среды в отношении 1:1. Посевы инкубируют при 37 ºС. Через 18-20 часов производят высев петлей на 3-5 чашек висмутсульфитного агара. Дополнительная идентификация проводится по общепринятой методике.

Концентрацию микробов при исследовании в ней шигелл и сальмонелл можно проводить с помощью мембранных фильтров. После того как пропустили определенное количество почвенной суспензии, каждый мембранный фильтр накладывают на чашку с дифференциальной средой и размазывают шпателем осадок с фильтра по всей чашке. Посевы выращивают при 37 ºС.