Методы, основанные на реакции агглютинации

Различают прямую и непрямую, или пассивную, агглютинацию.

В прямой агглютинации антигеном является сама микробная клетка или структурные компоненты ее поверхностной оболочки. Предел чувствительности реакции агглютинации микробов 0,01 мкг азота белка антител/мл.Количественные результаты реакции могут быть получены химическим определением содержания азота белка иммуноглобулинов.

Агглютинация определяется в большей степени особенностями клеточной оболочки и ее функциями, нежели свойствами агглютининов. Агглютинации способствует расположение антигенных рецепторов клеточной поверхности в виде скоплений. Если многовалентные агглютинины взаимодействуют одновременно с несколькими антигенными рецепторами, константа ассоциации Ка повышается по сравнению с Ка для случаев соединения антитела с антигеном единичной связью.

Ориентировочная реакция агглютинации. Ориентировочную РА проводят на предметных стеклах. Для этого на обезжиренное стекло наносят пастеровской пипеткой несколько капель сыворотки небольших (1:10-1:20) разведений и каплю изотонического раствора натрия хлорида для контроля. В каждую каплю сыворотки, а также в каплю контроля вносят петлю суточной живой культуры микроорганизма, взятой с поверхности плотной питательной среды, или пастеровской пипеткой вводят одну каплю взвеси убитых микроорганизмов (диагностикума). Внесенную культуру тщательно перемешивают, чтобы капля жидкости была равномерно мутной.

Реакция происходит при комнатной температуре. Результаты её учитывают невооруженным глазом через 5-10 минут, иногда для этого используют лупу (х5). Если предметные стекла поместить во влажную закрытую камеру, чтобы исключить испарение капель, то результаты реакции можно учитывать и через 30-40 минут.

При положительной реакции в капле с сывороткой отмечают появление хлопьев (крупных или мелких), хорошо видимых при покачивании покровного стекла. При отрицательной – жидкость остается равномерно мутной.

В тех случаях, когда количество микроорганизмов невелико и учесть результаты реакции трудно, каплю сыворотки с внесенной в неё культурой высушивают, препарат фиксируют, окрашивают фуксином Пфейффера и микроскопируют. При положительной реакции всё поле зрения свободно от микроорганизмов, только в отдельных участках наблюдается их скопление. При отрицательной реакции микроорганизмы равномерно распределены по всему полю зрения. Эта реакция получила название микроагглютинации.

Развернутая реакция агглютинации используется для определения серогруппы, серовара микроорганизмов; проводят её по схеме, представленной в таблице. Все ингредиенты разливают по пробиркам в определенной последовательности. Сыворотку разводят 2-кратно – 1:100, 1:200, 1:400 и т.д.

Таблица