Обобщенная (типовая) схема выделения возбудителей оппортунистических инфекций

Й день

1. Забор и доставка материала в лабораторию (см. выше).

2. Обработка материала с целью его гомогенизации и концентрации (в необходимых случаях).

3. Приготовление бактериального мазка, крашение его по методу Грама, микроскопия в световом микроскопе с иммерсионным объективом. В необходимых случаях, например, при подозрении на присутствие протозоа, грибов, хламидий, микобактерий, дополнительно применяют специальные методы краяшения.

4. Приготовление разведений материала в 10¹, 10², l0³ и 10⁴ раз в теплом 0,5% растворе хлорида натрия с 0,01% желатина (для предупреждения осмотического шока бактерий).

5. Посев одной капли I0² и 10⁴ разведений (0,05 мл) на секторы питательных сред в бактериологических чашках или в отдельные чашки.

Посев на секторы чашки может быть сделан также калибровочной платиновой петлей с диаметром ушка в 2 мм (объем водной суспензия в этом случае равен 0,005 мл). При этой методике засевают разведения 10¹ и 10³. В стандартный набор сред желательно включить:

· желточно-солевой агар (для стафилококков),

· среду Эндо или эозинметиловый агар (для энтеробактерий),

· кровяной агар (для стрептококков и ряда других требовательных к питательным средам видов),

· среду Сабуро (для кандид и других грибов),

· среду для контроля стерильности или другую среду для анаэробов.

В случаях, когда имеются указания на вероятный возбудитель (клиническая симптоматика, вид патологического материала, результаты микроскопии), должны быть использованы более селективные среды (например, среда с фурагином, шоколадный агар и др.).

Й день

1. Определение характера роста на питательных средах.

2. Подсчет количества колоний каждого типа на чашках с посевом разведении с перерасчетом КОЕ на один мл материала по формуле Х КОЕ = п х ФПД х ФР, где п - число колоний, ФПД - фактор посевной дозы (для капельного метода эта величина равна 20, для посева петлей - 200) и ФР - фактор разведения.

3. Микроскопия окрашенных по Граму мазков из всех типов колоний, КОЕ которых 1000 и более.

4. Отсев на среду накопления с колоний, КОЕ которых 1000 и более. В случаях забора материала из закрытых процессов для дальнейшего изучения отсевается 2-3 субкультуры, из открытых процессов - 5-6 субкультур. Эта мера вызвана гетерогенностью популяции: она удорожает исследование, но зато резко повышает его достоверность.

5. Ускоренная идентификация (при наличии методов и возможностей).

Й день

1. Установление "чистоты" культуры на средах накопления путем осмотра характера роста и микроскопией мазка.

2. Идентификация чистых культур. Тесты идентификации зависят от предполагаемого вида или рода выделенной культуры. Она проводится с помощью традиционных методик или автоматических и полуавтоматических систем.

3. Определение чувствительности выделенных культур к антибиотикам и в необходимых случаях к антисептикам.

Й день

1. Учет тестов, использованных для идентификации.

2. Оформление заключения о:

· семействе, роде, виде выделенных культур;

· количестве КОЕ выделенных культур в I мл материала;

· спектре и уровнях чувствительности к антимикробным препаратам;

· этиологической значимости выделенных культур и составе, их популяций.

3. По клиническим и эпидемиологическим показаниям определяют факторы патогенности и эпидемиологические маркеры (фаго-, серо-, резистенс-, бактериоциноваров и др.) у этиологически значимых культур.