М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я. На поверхность кожи предплечья (ладонная сторона) наносят пипеткой 1 каплю культуры E

На поверхность кожи предплечья (ладонная сторона) наносят пипеткой 1 каплю культуры E. coli. Распределяют суспензию стерильным стеклянным шпателем. Делают первый отпечаток с кожи пластинкой со средой Эндо (0 мин экспозиции). Через 10 мин экспозиции контакта микробов и кожи делают второй отпечаток (рядом с первым, но не с того же участка). Чашки с предметными стеклами-отпечатками помещают в термостат на 24 часа. Подсчитывают количество колоний на пластинках со средой Эндо. На основании полученных результатов рассчитывают индексы бактерицидности (ИБ) по формуле:

ИБ = (К_о – К₂₀)/К_о 100%,

где К_о – количество колоний сразу после контаминации кожи;

К₁₀ – количество колоний через 10 мин после контаминации кожи.

В норме ИБ > 95%.

ПРОТОКОЛ

Цель:

Время исследования	Количество колоний	Индекс бактерицидности
После нанесения культуры
Через 10 минут

Вывод: (Ответить на вопросы: 1. Соответствует ли индекс бактерицидности значениям нормы? 2. Возможные причины снижения бактерицидности кожи?)

Р а б о т а №2

Цель: Овладеть методом определения активности лизоцима в слюне

Задание. Определить активность (титр) лизоцима в собственной слюне. Учесть полученные результаты и данные занести в таблицу. Оформить протокол. Сделать заключение.

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

В пробирках готовят разведения слюны, начиная от 1:10 и заканчивая 1:640. В контрольную пробирку вместо слюны добавляют физиологический раствор. К каждому разведению добавляют 2-х млрд. взвесь микрококка (M. luteus) по 5 капель. Ставят в термостат на 20 мин. Определяют титр лизоцима по наличию просветления в среде (полный лизис микрококка). В норме титр лизоцима > 1:320.

Разведения слюны/ Ингредиенты	1: 20	1: 40	1: 80	1: 160	1: 320	1: 640	1: 1280	Контроль
Слюна 1: 10, мл	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	–
Физ.раствор, мл	1,5	1,5	1,5	1,5	1,5	1,5	1,5	2,0
2-х млрд. взвесь M. luteus, капли
Инкубация 20 мин, 37°С
Результат

в дез. раствор

«+» – лизис культуры, «–» – отсутствие лизиса

Цель:

ПРОТОКОЛ

Таблица

Вывод: Ответить на вопросы: (1. Соответствует ли активность лизоцима слюны норме? 2. Возможные причины снижения активности лизоцима? 3. Почему в качестве объекта использован Micrococcus luteus? 4. Зачем поставлен контроль культуры? 5. Что такое титр лизоцима в слюне?)

занятие №4 :	Цитокины. апоптоз Изучение активности гуморальных факторов врожденного иммунитета (продолжение)
УЧЕБНАЯ Цель:	1. Изучить гуморальные факторы врожденного иммунитета 2. Познакомиться с методами определения активности гуморальных факторов врожденного иммунитета. 3. Овладеть навыками определения и оценки естественной резистентности организма человека.

Вопросы для подготовки

1. Общее представление о цитокинах. Их основные группы. Цитокиновая сеть и принципы ее функционирования.

2. Провоспалительные цитокины (ИЛ-1, ФНО-α, ИЛ-6 и др.). Структура, клетки-продуценты, мишени, роль в иммунитете.

3. Противовоспалительные цитокины. Структура, клетки-продуценты, мишени, роль в иммунитете.

4. Интерфероны, классификация, структура, клетки-продуценты, мишени, роль в иммунитете.

5. Цитокиновые рецепторы. Сигнальные пути при действии на клетку цитокинов.

6. Апоптоз, его виды. Механизмы запуска апоптоза, роль цитокинов семейства ФНО и белков Вcl-2.

7. Каспазы, особенности строения и роль в апоптозе.

8. Использование цитокинов в клинике. Препараты интреферонов I типа и интерфероногены. Примеры.