Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Критерием, позволяющим судить о персистенции вирулентного вируса в стаде, являют­ся титры AT в сыворотке крови птиц

Критерием, позволяющим судить о персистенции вирулентного вируса в стаде, являют­ся титры AT в сыворотке крови птиц. Исследования проводят только с парными сыворотка-ми, полученными от одних и тех же птиц (или на одной и той же группе птиц). Первую про­бу берут перед вакцинацией (или в начале болезни), вторую - на 15-20-й день, последующие - в любое время (обычно 1 раз в месяц).

РТГА. Реакцию ставят с 4 ГАЕ в макро- и микровариантах по общепринятой методике Результаты считают положительными, если разница в титрах 1-й и 2-й сывороток составля­ет не менее 3-х разведении Повышение числа положительно реагирующих в РТГА между двумя исследованиями свидетельствует о распространении инфекции в стаде Постинфекци­онные AT обычно бывают в титре 10 lg и более и устанавливаются в течение продолжи­тельного времени, что указывает на проходящую или прошедшую инфекцию. Обнаружение в стаде птицы анти-ГА в разведении сыворотки крови 1:1024 - 1:2048 через 12-25 да после применения живых вирусвакцин не является сигналом о неблагополучии его в отношении НБ, наоборот, это свидетельствует о высокой реакции птицы на вакцину. Но если через 4-5 мес после вакцинации в стаде будут обнаружены титры AT 1:2048 или неровные титры, т е, когда у части проб крови (10-15%) их нет или они не превышают 1 2 - 1.4, а в другой части (14-20%) составляют 1:1024 - 1:2048 и выше, то стадо надо считать имевшим контакт с ви­рулентным вирусом.

Для определения активности эпизоотического процесса птиц через 2 нед обследуют по­вторно. Обнаружение высоких титров AT (1:4096 и выше) свидетельствует об обострении эпизоотической ситуации. Для серологического контроля из каждого птичника берут по 25 проб крови. Кратность исследований определяется эпизоотической ситуацией. AT обнаруживаются не только в сыворотке крови. Большое количество их содержится, например, в желтке яиц иммунизированных птиц. Этим путем происходит передача пассив­ной резистентности потомству. Обнаружение AT в желтке яиц, полученных от вакциниро­ванных кур, по мнению ряда авторов, более достоверно для определения состояния рези­стентности поголовья птиц. Готовят экстракт из желтка: в пробирку наливают 1,5 мл яичного желтка и 6 мл физиологического р-ра и тщательно перемешивают; добавляют 2 мл дихлорэтилена и 1 мл эфира. Содержимое тщательно смешивают встряхиванием. Оставля­ют смесь при 37°С до следующего дня, после чего центрифугируют в течение 10 мин при 1,000 мин ^-1 Фракция дихлорэтилена находится внизу на дне пробирки, над ней расположе­на полоса жира. Слегка мутную надосадочную жидкость (она соответствует разведению 1 5 желтка яиц) отсасывают пипеткой и используют в РТГА. Более простой метод заключается в следующем: желток отделяют от белка и 1 мл его разводят 2 мл фосфатного буфера с рН 7,2. Полученную смесь гомогенизируют, затем центрифугируют 15 мин при 1,000 мин ^-1. Для РТГА берут надосадочную жидкость между самым верхним слоем и осевшими частицами желтка. Титры AT в желтке соответствуют содержанию их в сыворотке крови кур. Считают, что для определения иммунного статуса стада кур к НБ значительно проще исследовать AT в яичных желтках, чем в сыворотке крови Такой подход экономичен, исключает стрессы и опасность распространения болезни при взятии крови. Исследуя желток, можно определить время первичной иммунизации цыплят, выведен­ных из анализируемой партии яиц. Титр пассивных AT в постнатальный период за 4,5 дня снижается на 1 log ₂.Так, при исходном титре AT 7 log к 18 дню он уменьшается до 3 log ₂, и до 5 log ₂ - к 9 дню. Надежный иммунный ответ будет получен у 80-100% птиц при вакцина­ции цыплят в указанном возрасте per os, интраназально или аэрозольно. Результаты иссле­дования желтка и парных сывороток кур позволяют судить об уровне сероконверсии и по нему определять напряженность поствакцинального иммунитета. Четырехкратное и более увеличение анти-ГА свидетельствует о циркуляции эпизоотического вируса. Аналогичное заключение делают по возрастанию индекса нейтрализации в 50-100 раз по сравнению с первоначальными данными.

Ставить диагноз по сероконверсии при внедрении полевого вируса в стадо иммунной птицы трудно без выделения вируса и определения его вирулентности на цыплятах Можно только предполагать, что птица имела контакт с полевым штаммом.

РРГ. Эта реакция (РРГ) получила широкое применение и высокую оценку при многих парамиксовирусных инфекциях. В опытах с вирусом НБ показаны линейная зависимость диаметра зоны гемолиза от концентрации AT и полная корреляция результатов РРГ и РТГА. Так, при титрах в РТГА 1:16-1:32 диаметр зоны гемолиза составлял 6-7 мм, а при 1:64 и 1.1024 - 7,5±0,3 и 9,5±0,5 мм соответственно. При повторных исследованиях одних и тех же сывороток расхождение показателей не превышало 0,5 мм.

ELISA. Многочисленные данные зарубежных исследователей свидетельствуют о высо­кой чувствительности, специфичности этого метода и корреляции между титрами AT в РТГА и ELISA. Разработан набор для скрининга сыворотки птиц на присутствие AT к НБ Титры в ELISA выше, чем в РТГА и показывают высокую степень корреляции. При исследовании сывороток крови от вакцинированных птиц титр AT в ELISA был в 2-4 выше, чем в РТГА. AT к вирусу в ELISA и РТГА выявляются в 98, и 91,7% соответст­венно, коэффициент корреляции равен 0_;85. Однако ELISA отличается большей чувст­вительностью. На основании реактивности с монАТ штаммы вируса НБ разбиты на 5 групп. Для постановки реакций ELISA и РЗГА при обнаружении AT к вирусу НБ целесооб­разно использовать хлороформный экстракт

Дифференциальная диагностика. НБ следует дифференцировать от ИБП, гриппа, ПМВ-2, ИЛТ и микоплазмоза птиц. Для лабораторной диагностики гриппа птиц, ИБ и НБ используют диагностикумы биофабричного производства. Дифференциация вирусов гриппа, насчитывающих 14 подтипов, и парамиксовирусов, включающих 9 серотипов, возможна только в лаборатории. Особое внимание следует сосредоточить на эпизоотологическом мо­ниторинге при этих болезнях, исследовании парных сывороток и периодическом лаборатор­ном анализе патматериала.