Реакции с трихлоруксусной и сульфосалициловой (2-гидрокси-5-сульфобензойной) кислотами являются специфическими и чувствительными. Их используют в клинических лабораториях при обнаружении белка в моче и других биологических жидкостях. Сульфосалициловая кислота способна осаждать продукты распада белков - пептиды. Трихлоруксусная кислота осаждает только белки. Ее используют при определении небелкового (остаточного) азота крови, в состав которого входят продукты распада и обмена белков.
В две пробирки наливают по 1 мл раствора белка. В одну пробирку добавляют 1-2 капли сульфосалициловой кислоты, а в другую - трихлоруксусной кислоты. Выпадает осадок белка.
Контрольные вопросы
1. Как можно разделить смесь аминокислот в гидролизате белка?
2. Какие цветные реакции на белки знакомы Вам из курса биоорганической химии?
3. Какая аминокислота, содержащаяся в белках, обнаруживается реакцией Миллона? Приведите ее формулу.
4. Какая аминокислота, содержащаяся в белках, обнаруживается реакциями Адамкевича и Шульце - Распайля? Приведите ее формулу.
|
|
5. Чем обусловлено осаждение белков при действии солей тяжелых металлов?
6. Что понимают под денатурацией белка?
7. Какое практическое применение находят реакции осаждения белков органическими кислотами?
8. Почему в клинической практике для осаждения белков используют азотную, а не серную или соляную кислоты?
Работа 2. Сложные белки – фосфопротеины и гликопротеины
Фосфопротеины.
Типичным представителем фосфопротеинов является казеин молока. При щелочном гидролизе казеин распадается на белок и фосфорную кислоту.
Открытие в гидролизате казеина белкового компонента.
К 0,5 мл гидролизата казеина прибавляют 5 капель 10% раствора гидроксида натрия и по каплям 1% раствор сульфата меди до появления сине-фиолетового окрашивания. Положительная биуретовая реакция доказывает белковую природу казеина.
Открытие в гидролизате фосфорной кислоты.
1 мл гидролизата нейтрализуют 25% азотной кислотой (контроль по индикаторной бумаге) и добавляют 0,5 мл раствора молибдата аммония в азотной кислоте. Через 5 минут осадок белка и продуктов неполного гидролиза белков отфильтровывают. К фильтрату добавляют 0,5 мл 2% раствора гидрохинона и оставляют на 5 минут. Затем добавляют по каплям добавляют 1 мл раствора карбонат-сульфита натрия. Появляется синее окрашивание раствора, обусловленное образованием молибденовой сини.