Опыт 2. Определение общего холестерина в сыворотке крови прямым методом по реакции Златкис – Зака

Холестерин – представитель стероидов, имеющий ядро циклопентатпергидрофенантрена в основе своей структуры. Фонд холестерина создается за счет холестерина пищи и его синтеза в самом организме. Холестерин входит в состав клеточных мембран, служит предшественником при синтезе других стероидов - желчных кислот, стероидных гормонов, витамина D₃.

Норма содержания холестерина в сыворотке крови – 120-250 мг% (3,12-6,50 ммоль/л).

Метод Златкис – Зака основан на реакции холестерина с уксусной и серной кислотами в присутствии хлорида железа. Происходит дегидратация холестерина и его окисление с образованием окрашенных продуктов.

Для приготовления опытной пробы к 0,1 мл сыворотки крови прибавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл рабочего раствора хлорида железа, перемешивают.

Для приготовления контрольной пробы к 0,1 мл дистиллированной воды прибавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл рабочего раствора хлорида железа.

Пробы оставляют на 15 минут.

Измеряют оптическую плотность опытной пробы против контроля на фотоэлектроколориметре при длине волны 510-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см.

Для построения калибровочного графика из стандартного раствора холестерина готовят разведения, как указано в таблице:

Через 20 минут пробы фотометрируют против контроля. По результатам строят калибровочный график и определяют содержание холестерина в сыворотке крови (норма, гипо- или гиперхолестеринемия).

Контрольные вопросы

1. К какому классу ферментов относится панкреатическая липаза?

2. Какой тип химической связи расщепляется панкреатической липазой?

3. Каковы функции солей желчных кислот в переваривании и всасывании липидов?

4. Клинические симптомы стеатореи, характеризующейся избытком липидов в кале, обусловлены чаще всего двумя причинами: а) недостаточной секрецией желчных кислот;
б) отсутствием секрета поджелудочной железы. Почему эти причины приводят к появлению липидов в кале?

5. Объясните, почему у пациентов со сниженной секрецией бикарбонатов поджелудочной железой даже при нормальной секреции липазы и колипазы развивается стеаторея?

6. Почему чаще встречается гиперхолестеринемия, а не гипохолестеринемия?

7. Как изменится синтез холестерина при питании только растительной пищей? Почему?

8. Укажите, в каких органах происходит синтез холестерина «на экспорт».

9. Перечислите функции холестерина в организме.

10. Каким образом большая часть холестерина выводится из организма?