Аудиторная работа. 1. Влияние температуры на каталитическую активность амилазы слюны.Амилаза слюны катализирует расщепление крахмала через стадию образования декстринов до

Лабораторная работа:

1. Влияние температуры на каталитическую активность амилазы слюны. Амилаза слюны катализирует расщепление крахмала через стадию образования декстринов до дисахарида - мальтозы, которая обладает восстанавливающими свойствами.О действии фермента можно судить по исчезновению субстрата амилазы (крахмала) или по образованию конечных продуктов расщепления. Крахмал обнаруживается пробой Люголя (синее окрашивание со свободным иодом).

Об активности фермента можно судить также по обнаружению продуктов реакции. Мальтоза открывается реакцией Троммера (при нагревании с восстанавливающим углеводом гидрат окиси меди восстанавливается сначала в гидрат закиси желтого цвета, затем – в закись меди кирпично-красного цвета).

Ход работы: В четыре пробирки отмерить по 4 мл 0,5%-ого раствора крахмала и по 1 мл слюны, предварительно разведенной в 10 раз водой. 1-ю пробирку (незамедлительно) поместить в кипящую водяную баню, 2-ю – в ледяную, 3-ю - в термостат при 37⁰ С, 4-ю оставить при комнатной температуре. Через 10мин содержимое каждой пробирки разделить на две примерно равные части.

С одной частью провести качественную пробу на крахмал, с другой – на восстанавливающий углевод (пробы Люголя и Троммера соответственно):

а. к содержимому одной пробирки добавить 2 капли раствора Люголя – появление синего окрашивания свидетельствует о наличии крахмала;

б. к содержимому второй пробирки добавить 1 мл 10% -ого раствора едкого калия и по каплям внести 1% -ный раствор сернокислой меди до образования неисчезающего осадка, затеи нагреть до кипения –появление желтого окрашивания, переходящее в кирпично-красное, указывает на наличие восстанавливающего углевода.

Сравнить результаты проб, проведенных при разных температурах и сделать выводы о температурном оптимуме амилазы. Построить график зависимости скорости реакции от температуры.