Окраска по Леффлеру
1. Приготовить равномерный фиксированный мазок.
2. Окрасить мазок метиленовым синим Леффлера, красить 3-5 мин.
3. Слить краситель и промывать препарат водой.
4. Высушить препарат на воздухе.
З а д а н и е №4
Изучить подвижность бактерий в препарате «раздавленная капля» из суспензии маслянокислых бактерий. Микроскопировать препарат с объективами 8´ и 40´, при вогнутом зеркале и опущенном конденсоре. При исследовании живых микробов следует отличать характер подвижности бактерий – активный от пассивного (броуновского движения). Препарат зарисовать.
М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я
Прижизненный препарат «раздавленная капля»
1. Приготовить чистое и обезжиренное предметное стекло.
2. Взять стерильной пипеткой каплю суспензии микроорганизмов.
3. Нанести каплю в центр предметного стекла.
4. Опустить ребром на край капли покровное стекло под углом 45° (поместить на каплю так, чтобы в ней не образовывались пузырьки воздуха).
Внимание: каплю нужно брать такой величины, чтобы она заполняла все пространство между покровным и предметным стеклами и не выступала за края покровного стекла. Если жидкость будет нанесена в избытке, ее необходимо удалить при помощи полосок фильтровальной бумаги.
|
|
Занятие №4
Питание, дыхание и размножение микроорганизмов
Бактериологический метод диагностики
Вопросы для подготовки
1. Питательные субстраты бактерий. Типы питания прокариот – автотрофы, гетеротрофы, прототрофы, ауксотрофы и т.д.
2. Механизмы транспорта питательных веществ в клетку – пассивная диффузия, облегченная диффузия и активный транспорт.
3. Механизмы транспорта веществ из бактериальной клетки. Системы секреции прокариот, строение и функции. Примеры.
4. Питательные среды, их классификация, состав и назначение. Примеры.
5. Принципы культивирования микроорганизмов в условиях лаборатории (температура, влажность, аэрация, окислительно-восстановительный потенциал, рН среды, освещенность). Факторы роста, их химическая природа.
6. Кривая роста бактериальной популяции на жидкой питательной среде, ее подробный анализ. Система проточного культивирования бактерий, ее использование в промышленной микробиологии.
7. Пигменты микроорганизмов. Классификация по химическому составу и растворимости. Биологический смысл пигментообразования.
8. Методы выделения чистых культур бактерий. Определение понятий: «чистая культура», «накопительная культура», «биовар», «штамм», «колония».
9. Бактериологический метод диагностики (I и II этапы/дни исследования). Цель и задачи. Морфолого-культуральные свойства бактерий.
|
|
10. Заполнить таблицу «Некоторые приемы выделения чистых культур микроорганизмов»:
Метод | Принцип метода | Область применения |
Посев по Коху (серийные разведения) | ||
Посев методом «истощения» | ||
Посев по Дригальскому | ||
Посев на элективные среды | ||
Посев газоном | ||
Обработка исследуемого материала кислотой или щелочью | ||
Прогревание исследуемого материала при 80°С | ||
Фильтрация исследуемого материала через мембранные фильтры | ||
Посев по Шукевичу |
Практическая работа
З а д а н и е №1
Классифицировать предложенные питательные среды, наиболее часто используемые в медицинской микробиологии. Результаты представить в виде таблицы.
Питательная среда | Происхождение | Консистенция | Назначение | Состав** | |||||
Естественная | Искусственная | Жидкая | Полужидкая | Плотная | Общая | ДДС* | Элективная* | ||
*указать дифференцирующий/элективный фактор
**указать для одной питательной среды назначение каждого компонента
З а д а н и е №2
Описать культуральные свойства чистых культур бактерий на жидких питательных средах и скошенном мясо-пептонном агаре. Результаты оформить в виде рисунка с комментариями.
М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я
При описании роста микроорганизмов на жидких питательных средах отмечают: помутнение среды, образованием пленки, нитей или осадка. Отмечают степень помутнения – слабая, умеренная; особенности пленки – слабая, окрашенная, хрупкая, тонкая; свойства осадка – слизистый, хлопьевидный, рыхлый и др.
При описании роста микроорганизмов по штриху отмечают следующие особенности: скудный, умеренный, обильный, диффузный или четковидный рост. Характеризуют оптические свойства налета, его цвет, поверхность и консистенцию.
З а д а н и е №3
Описать культуральные свойства бактерий на плотных питательных средах. Результаты оформить в виде таблицы.
Изучаемые колонии | Питательная среда | ||
Форма | |||
Размер | |||
Цвет | |||
Характер края | |||
Консистенция | |||
Примечание | |||
Рисунок |
М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я
Форма колонии – округлая, неправильная, ризоидная и т.д.
Размер (диаметр) колонии измеряют в мм; если размер колонии не превышает 1 мм, то их называют точечными.
Цвет колонии – бесцветная (грязно-белые колонии относят к бесцветным) или пигментированная – белая, желтая, золотистая, оранжевая, сиреневая, красная, черная. Особо отмечают выделение пигмента в субстрат. При описании колоний грибов отмечают пигментацию воздушного мицелия.
Поверхность колонии – гладкая, шероховатая, бороздчатая, складчатая, морщинистая, с концентрическими кольцами или радиально исчерченная.
Характер края – ровный, волнистый, зубчатый, бахромчатый и т.д. Край и структуру колонии определяют с помощью лупы или при малом увеличении микроскопа.
Консистенцию колонии определяют, прикасаясь к ее поверхности петлей. Колония может легко сниматься с агара, быть плотной, мягкой или врастающей в агар, слизистой (прилипает к петле), тягучей, пленчатой (снимается целиком), хрупкой (легко ломается при прикосновении петлей).
З а д а н и е №4
Изучить культуральные свойства плесневых грибов и дрожжей на плотных и жидких питательных средах. При описании культуральных свойств плесневых грибков отмечают характер мицелия (субстратный или воздушный), наличие или отсутствие пигмента. Результаты оформить в виде таблицы*.
Изучаемые свойства | Питательная среда | |
Форма колонии | ||
Размер колонии | ||
Цвет колоний | ||
Характер края | ||
Консистенция | ||
Примечание | ||
Рисунок |
*данные критерии используют для дрожжей
|
|
Справочный материал для оформления протоколов