Мастнокжлое брожение вызывается облигатно-анабэробными маслянокислыми бактериями и представляет распад сахара на масляную кислоту и газы с высвобождением энергии.
Химизм:
О 6Н12О6 = СН 3СН2 СНз СООН + 2 С03 + 2 Н2 + Q ккал.
масляная кислота
Схема:
1. С6Н12О6 = 2 СН зСОСООН + 2 Н2
пировиноградная кислота
2. 2 СНз СОСООН = 2 СНз - СНО + 2 С02
уксусный альдегид
3. СНз СНО + НСН2СНО = СН 3СНОНСН 2СНО
альдоль
4. СНз СНОНСН2 СНО - СН3 СН2 СН2 СООН
масляная кислота
Проведение задания.
1. Приготовить накопительную культуру.
2. Прокипятить исследуемую почву в колбе в небольшом количестве питательной среды для уничтожения неспороносных форм бактерий.
3. Поместить накопительную культуру в термостат.
4. Изучить состав и зарисовать возбудителей маслянокислого брожения.
5. Изучить химизм процесса.
Приготовить накопительную культуру м.о.
вещество | потребное кол-во |
бобовый бульон | 2,0 |
крахмал | 0,5 |
пептон | 0,5 |
натрий хлор | 0,5 |
мел | 2,0 |
В колбу емкостью 150 мл. вносят почву 1\ 2 чайной ложки, наливают 30-50 мл. приготовленной среды и кипятят 10 мин. на электроплите для уничтожения бесспоровых форм бактерий. После кипячения доливают питательной средой до верху и закрывают плотно пробкой с газоотводной трубкой, которую погружают в пробирку с водой (изоляция культуры от воздуха). Помещают в термостат при 25 0 С на 7-10 суток. На 3-5 сутки начинается газообразование и появляется запах масляной кислоты. Для микроскопирования жидкость из колбы с накопительной культурой берут так: погружают пипетку в колбу в нижний слой жидкости и набирают несколько капель, переносят пробу на предметное стекло.
|
|
При микроскопирования следует добавлять в препарат 1-2 капли раствора Люголя, так как клетки этой группы м.о. богаты гранулезой, дающей с йодом синее окрашивание.
При мнкроскопировании возбудителей маслянокислого брожения углеводов отыскивают Clostridium pasteurianum вегетативную и спорообразующую форму.
Вегетативная форма – крупная, подвижная палочка со слегка заостренными кончиками. Спорообразующая J имеет форму веретена. Споры цилиндрические. Другие возбудители маслянокислого брожения имеют форму барабанной палочки.
Вопросы для самопроверки.
1. Что такое молочнокислое брожение?
2. Напишите уравнение 2 типов молочнокислого брожения, охарактеризуйте возбудителей этих процессов.
3. Напишите уравнение маслянокислого брожения, назовите и охарактеризуйте их возбудителей.
4. Что такое «верховое» и «низовое» брожение?
5. При какой температуре идут эти процессы?
6. Химизм спиртового брожения.
7. Что из себя представляют дрожжи рода сахаромицеты?
8. Как готовят накопительную культуру маслянокислых м.о.?
|
|
9. Как обнаружить наличие масляной кислоты в накопительной культуре?
10.Как приготовить накопительную культуру молочнокислых м.о.?
11. Где нашло применение спиртовое, молочное и маслянокислые брожения?
Домашнее задание:
5. Оформление отчета по лабораторному занятию.
6. Подготовиться к защите лабораторного занятия.
Лабораторная работа № 9
Возбудители гниения и их культивирование (картофельная палочка, сенная палочка, палочка Протея и др.)
Учебная цель работы: Изучить микроорганизмы. вызывающие гниение белковых ве ществ, методику их культивирования.
Материальное обеспечение:
1. Микроскоп 1 шт.
2. Краски по Грамму 1 экз.
3. Микробиологическая петля 1 шт.
4. Спиртовка 1 шт.
5. Двойной флакон для иммерсионного масла и бензина 1 шт.
6. Этиловый спирт 1 флакон
7. Песочные часы 1 шт.
8. Накопительные культуры гнилостных микроорганизмов
9. Питательная среда состава: мясной бульон, 0,5 % NaCl, 3 % пептон
10.Колба Эрленмейерана 50 мл. 1 шт.
11.Фильтровальная бумага, смоченная раствором уксусного свинца
12.Индикаторная бумага - красный лакмус 1 шт.
13.Почва 5 г.
14. Ватная пробка для колбы 1 шт.
15.Предметные стекла
Организация и методика выполнения работы.
Накопительная культура гнилостных (аммонифицирующих) микроорганизмов готовят следующим образом: в колбу Эрленмейера на 50 мл. наливают 30 мл. питательной среды и заражают почву, на края колбы подвешивают смоченную водой лакмусовую бумагу и фильтровальную бумагу смоченную уксуснокислым свинцом, закрывают пробкой и термостатнруют 5-7 суток при температуре 22 - 25° С. После термостатирования отмечают изменения в окраске индикаторной бумажки. Для изучения возбудителей каплю сброженной жидкости наносят на предметное стекло, фиксируют, красят по Граму, микроскопируют с иммерсией при увеличении объективов х 90. В препарате разыскивают н зарисовывают 3 группы аммонифицирующих бактерий: аэробные Bacillus subtilis, Вас. Mycoides; факультативно анаэробные Bact. coli, Proteus vulgaris; анаэробные Clostridium putrificum. Препарат зарисовать.
Накопительную культуру картофельной палочки готовят так: картофель очищают от кожуры, режут кубиками, натирают мелом, помещают в чашки Петри и заливают стерильной водой, термостатнруют при температуре 37 С в течение 24 часа Для изучения возбудителей. каплю жидкости стерильной петлей наносят на поверхность предметного стекла „ фиксируют, окрашивают по Граму, микроскопируют объективом х 90, зарисовывают.
Bacillus mesentericus культивируют на мышечной ткани белка животного или рыбы. Кусочки мяса животных или рыбы помещают в пробирку колбу „ заливают водой и термостатируют при температуре 37°С, в течение 24 часов.
Культуру микроорганизмов фиксируют и окрашивают по Граму микроскопируют с объективом х 90, зарисовывают, делают вывод какие из них являются грамположительными, а какие грамотрицательными.
1. Аэробные гнилостные микробы:
Вас. Mycoides - почвенная бактерия. Небольшая (1,6 - 3,5 мм.), грамположительная палочка, дающая споры овальной формы разной величины, перитрихи. На твердых питательных средах образуют характерные колонии, напоминающие мицелий (грибовидный).
Bacillus mesentericus - картофельная палочка. Очень близка по форме предыдущей бактерии, образует крупные споры устойчивые к высоким температурам. Размеры (1,5-5 мм.), грамположительная, дающая цепочки из бактерий, перитрихи.
Bacillus subtilis - сенная палочка. Вызывает аммонификацию белка. Короткая подвижная палочка с округленными концами. Образует овальные споры. Грамположительная.
2. Факультативно - анаэробные гнилостные микробы:
Proteus vulgaris - вульгарный протей, полиморфна т.е. резко изменяет форму и размеры при развитии на питательных средах различного состава. Бесспоровая палочка, перитрихи.Длина клеток (1,6 - 4 м.) при разложении белка создает сильнощелочную реакцию и образует сероводород и индол, а при сбраживании углеводов вызывает их сбраживание с образованием газов СО, Н и органических кислот. Грамогрицательная.
|
|
Bact. coli - кишечная палочка, подвижная, бесспоровая, грамотрицательная. Принимает участие в разложении белка. Встречается в составе микрофлоры кишечника человека и животных.
3. Анаэробные гнилостные микробы:
Clostridium putrificum - грамположительная спороносная палочка (вид барабанной палочки). Углеводы не сбраживает, а белки разлагает с образованием большого количества газов.
Clostridium sporogenes - сбраживает углеводы, маленькая палочка, спорообразующая.
Вопросы для самоконтроля.
1. Что такое гниение?
2. Какие микроорганизмы вызывают гниение белковых веществ 9
3. Какое значение имеет гниение в природе и пищевой промышленности?
4. Какие конечные продукты образуются в результате гниения?
5. Как готовится накопительная культура аммонифицирующих м.о.?
6. Назовите аэробные аммонифицирующие м.о.?
7. Назовите факультативно-анаэробные аммонифицирующие м.о.?
8. Какие вы знаете строгие анаэробы?
9. Дать характеристику картофельной, сенной и кишечной палочкам 9
10.Какую температуру выдерживают строгие анаэробы?
Домашнее задание:
7. Оформление отчета по лабораторному занятию.
8. Подготовиться к защите лабораторного занятия.
Лабораторная работа № 10
Посев микроорганизмов почвы, воздуха и воды
для санитарно-бактериального исследования.
Учебная цель работы: привить навыки определения санитарно-бактериологических показателей воды, микробным числом, коли-титром, коди-индексом. Привить навыки определения микробного числа воздуха, определения микрофлоры почвы.
Материальное обеспечение: стерильный расплавленный МПА; стерильные пипетки на 1 мл; чашки Петри; чашки Петри со средой Эндо; пробирки со стерильными средами Гисса с мальтозой; мембранные ультрафильтры № 3; химические стаканы; предметные стела; покровные стекла; пинцеты; дистиллированная вода; фильтр Зейтца; насос Камовского; пробы воды; микроскоп; набор красителей для окраски по Грамму; бактериологические петля; иммерсионное масло; горелки; спирт; спиртовки; стерильный цилиндр; вата; водяная баня; песочные часы (на 1, 2, 3 мин.); тех. весы с разновесами; метаялические петли; почва; агар бобово-пептонный слабощелочной или МПА простерилизованный в пробирках; ножницы; этикетки.
|
|
Санитарно-бактериологический анализ воды включает в себя определение микробного числа воды, титра-Coli, индекса- Coli.
Микробное число воды - количество колоний микроорганизмов вырастающее при посеве 1 мл воды за 24 часа при температуре 200С.
Микробное число воды дня водопроводной воды не должно превышать 100, а для воды колодцев и артезианских скважин допускается до 1000.
Определение микробного числа воды
Начинают с приготовления нужного разведения. Пробу воды тщательно перемешивают, стараясь не замочить пробку, после чего стерильной пипеткой отбирают требуемое количество воды 1 или 0,1 мл. воды высевают непосредственно в чашках Петри без разведения. Для засева меньших количеств воды (если предполагается большая загрязненность) ее предварительно разводят стерильной водопроводной водой. Из каждой пробы употребляют для посева не менее 2 различных разведений. Воду вносят в стерильную чашку Петри, затем выпивают 20 мл. расплавленного и остуженного до 37° С стерильного МПА. Вращательным движением осторожно смешивают ровным слоем по чашке с водой и распределяют. На крышке чашки делают подробную запись о пробе и после застывания агара ее помещают в термостат при 370 С предварительно перевернув чашку Петри вверх дном. Пробы воды из водоемов вначале выращивают при температуре 20 С 48 часов.