Написать отчет о проделанной работе

 

Лабораторная работа № 4

Выращивание микробов на различных питательных средах

Приготовление питательных сред для выращивания микроорганизмов. 

Цель: научить обучающихся готовить питательные среды для выращивания микроорганизмов.

 

Приборы и посуда: термометр, сахариметр, весы технические с разновесами,деревянная мешалка, эмалированная кастрюля, водяная баня, мерный цилиндр, пробирка.

 

Материалы и реактивы: агар, крупнодробленый ячменный солод, раствор йода, бульонные мясные кубики, пентон, молоко, хлорид натрия, желчь, глюкоза, кристаллический фиолетовый.

Порядок выполнения работы:

1. Приготовления затора:

Приготовление раствор йода. Для этого растворить 1 г йодистого калия в 5 мл воды, к полученному раствору добавить 1 г йода и довести объем смеси дистиллированной водой до 300 мл.

В эмалированную кастрюлю насыпать 1 часть солода, добавить 4 части теплой воды и перемешать. Температура смеси должна быть 50 градусов.

Поставить кастрюлю на водяную баню при 50 градусах и выдержать в течении 30 минут. Затем подогреть баню, чтобы температура повысилась до 63-65 градусов, и выдерживать при этой температуре до прекращения окрашивания раствора при добавлении йодного раствора (йодная проба на содержание крахмала).

2. Приготовить сусло:

Подготовленный затор профильтровать через полотно. Полученный фильтрат нагреть до кипения и кипятить 5-10 минут. Выпавший при кипячении осадок отфильтровать.

Сусло развести водой до плотности 8-10 % по сахариметру, разлить в сосуды и простерилизовать в автоклаве при 0,05 МПа в течении 30 минут.

3. Приготовить сусло-агар:

К готовому суслу добавить 2 % агара, и смесь нагреть до расплавления агара. Затем разлить в пробирки и колбы и простерилизовать.

4. Приготовить мясо-петитонный агар:

Приготовление мясо-пептонного агара, 5 бульонных кубиков (20 г) растворить в 1 литре воды. Добавить 100 г пептона и 2 % агара. Агар расплавить, и среду кипятить в течении 30 минут. После кипячении смесь профильтровать через марлю и вату и простерилизовать в течении 10 минут.

5. Приготовить обезжиренное молоко:

Молоко пропустить через центрифугу. Удалить сливки. Затем разлить в пробирки по 5 и 10 мл и стерилизовать при температуре 121 градус а течении 10 минут.

6.Приготовить физиологический раствор:

 Приготовление физиологического раствора. Отмерить 1 л водопроводной воды. Взять навеску 8,5 г хлорида натрия и растворить в воде. Раствор разлить в чистые пробирки диаметром 18-20 мм по 10 мл или в колбы - по 93 мл. Стерилизовать в течении 20 минут.

После стерилизации в пробирках остается около 9мл физиологического раствора, а в колбах – около 90 мл, т.е. такое количество, которое необходимо для приготовления разведения из посевного материала.

 

Получение чистых культур микроорганизмов

 

Порядок выполнения работы:

Чистая культура- это микроорганизмы одного вида, полученные из одной или нескольких клеток в результате размножения на искусственной питательной среде.

1. Получение изолированных колоний.

Небольшое количество исследуемого материала внести бактериологической петлей в пробирку с расплавленным и охлажденным до 43⁰ С агаром. Тщательно перемешать и вылить смесь на чашку Петри поместить в термостат; на поверхности агара развиваются изолированные колонии.

2. Получение чистой культуры.

Для получения чистой культуры бактериологической петлей взять колонию с агара и стерильно перенести в пробирку со стерильной водой. Взболтать и затем чистой пипеткой перенести несколько капель нановую чашку Петри с агаром.

На этой стадии необходимо тщательно соблюдать стерильность, а при попадании посторонних видов чистой культуры не получится. Капли распределяют по всей поверхности с помощью бактериологической петли. Помещают в термостат на 16-20ч. На агаре развивается чистая культура.

3. написать отчет о проделанной работе.

 

Контрольные вопросы:

1. Что такое посев в микробиологии?

2. Что такое чистая культура?

3. Какими приспособлениями пользуются при посеве микроорганизмов?

4. Для каких целей используют питательные среды?

5. На какие две группы подразделяются питательные среды?

6. При каких условиях осуществляется стерилизация лабораторной посуды?