Цель занятия:
- изучить методики определения яиц гельминтов;
- изучить амбарных вредителей.
Анализ на гельминты
1 Флотационные методы определения наличия яиц и личинок гельминтов
Сущность методов
Флотационные методы основаны на определении наличия яиц нематод, цестод некоторых трематод, личиночных стадий паразитических и свобод но живущих нематод, а также члеников и половозрелых форм, всплывающих на поверхность флотационного раствора с испытуемым материалом, с помощью микроскопа.
При определении наличия яиц нематод, цестод и трематод под микроскопом используют соответствующий атлас яиц гельминтов.
2. Метод Фюллеборна для диагностики нематодозов и цестодозов
Анализируемую пробу массой 1 г заливают в ступке 3—5 см3 насыщенного раствора хлористого натрия тщательно размешивают пестиком или стеклянной палочкой и по мере размешивания добавляют раствор, доводя объем до 15 см3. Затем процеживают через сито в чистый стакан и отстаивают в течение 40 мин. За время флотации яйца нематод и цестод, удельный вес которых меньше веса насыщенного раствора хлористого натрия, всплывают на поверхность и концентрируются на поверхностной пленке.
|
|
Затем, прикасаясь металлической петлей к разным местам поверхностной взвеси, снимают три капли раствора и наносят на предметное стекло, и исследуют под микроскопом. Для недопущения быстрого высыхания и кристаллизации капель на предметных стеклах к ним добавляют по небольшой капле 50 %*ного водного раствора глицерина.
Металлическую петлю обжигают над пламенем спиртовки в начале и конце испытаний. При массовых исследованиях каплю на предметном стекле покровным стеклом не накрывают, а металлическую петлю промывают резкими движениями в стаканчике с дистиллированной водой.
3 Седиментационные методы диагностики трематодозов
Сущность методов
Седиментационные методы основаны на осаждении яиц гельминтов в процессе обработки проб дистиллированной водой или другими жидкостями и исследовании осадка.
Данные методы применяют для диагностики трематодозов, реже — других гельминтозов.
3.3 Метод последовательного промывания для диагностики фасциолеза, парамфистоматоэа, дикроцепиоза и других гельминтозов
Анализируемую пробу массой З г помещают в стакан вместимостью 50—100 см3, вливают небольшое количество дистиллированной воды и палочкой размешивают до получения жидкой кашицеобразной массы, затем добавляют дистиллированную воду порциями до объема 50 см3 при постоянном размешивании.
Смесь фильтруют, пропуская через ситечко в другой стакан, и отстаивают в течение 5 мин до образования осадка, после чего верхний слой жидкости сливают до осадка, а к осадку добавляют снова такое же количество дистиллированной воды и отстаивают в течение 5 мин после чего жидкость снова сливают до осадка.
|
|
Такие операции повторяют до тех пор, пока надосадочный слой воды не будет прозрачным. Последний раз верхний слой сливают или отбирают спринцовкой, опустив наконечнике стакан, не доводя до дна 1,5—2,0 см, а осадок поочередно разливают на часовые или предметные стекла и исследуют под микроскопом.
4 Метод Болховитинова для выявления яиц трематод
В лабораторные пробирки наливают по 6—8 см3 насыщенного раствора хлорида натрия и вставляют в штатив наклонно, помещая нижний конец пробирки в гнездо, не противоположное верхнему отверстию, а в соседнее.
Анализируемые пробы массой 1—2 г тщательно размешивают в ступке с 10—15 см3 дистиллированной воды комнатной температуры. Затем медленно по стенкам воронки через двойной слой марли процеживают содержимое из ступки в пробирку таким образом, чтобы смесь оказалась в поверхностном слое раствора соли.
Рекомендуемое время отстаивания — 30—90 мин. За это время тяжелые яйца трематод оседают на дно пробирки. Затем верхний слой сливают, а осадок помещают на часовое или предметное стекло и исследуют под микроскопом.