Реакция, основанная на биологических свойствах

Реакция гемолиза эритроцитов:

Для проведения этой реакции используют эритроциты крови разных животных. Присутствие холестерина в плазме крови может задерживать гемолиз, поэтому кровь необходимо дефибринировать. Концентрация водородных ионов среды оказывает существенное влияние на гемолиз. Учитывая это, готовят: 1% извлечение из ЛРС и 2% взвесь эритроцитов на физиологическом растворе (или на буферной смеси фосфатов с pH=7,4). Смешивают равные объемы извлечения из ЛРС и взвеси эритроцитов, через некоторое время кровь становится прозрачной, ярко-красной (произошел гемолиз).

Хроматография

Для обнаружения сапонинов в ЛРС широко используют тонкослойную хроматографию на силикагеле в системе растворителей ХЛОРОФОРМ-МЕТАНОЛ-ВОДА (65:35:10). Для обнаружения зон сорбции сапонинов на хроматограммах используют следующие реактивы:

· пары йода - бурые пятна на желтом фоне;

· насыщенный раствор треххлористой сурьмы в хлороформе с последующим нагреванием при 90-100°С - розово-фиолетовые пятна;

· спиртовый раствор фосфорно-молибденовой кислоты - синие пятна на желтом или желто-зеленом фоне (окраска фона снимается парами аммиака);

· спиртовым раствором кремне-вольфрамовой кислоты с последующим нагреванием при 100-120°С - розовые, оранжевые, красные, фиолетовые, серые и др. пятна на бесцветном фоне;

· реактив Санье (5% спиртовый раствор ванилина) с нагреванием при 110°С и последующей обработкой 50% водным раствором серной кислоты - спиростаноловые сапонины проявляются в виде желтых пятен, фуростаноловые - зеленых;

· реактив Эрлиха (спиртовый раствор п- диметиламинобензальдегида с добавлением концентрированной HCl) - фуростаноловые сапонины проявляются в виде пятен розового или красного цвета;

· для обнаружения тритерпеновых сапонинов хроматограмму обрабатывают 20% раствором серной кислоты, нагревают в сушильном шкафу при температуре 115-120°С в течение 15 мин - появляются фиолетовые пятна.