В центрифужную пробирку наливают 0,5 мл сыворотки, в которой не наблюдается прямой реакции с диазореактивом Эрлиха. Затем прибавляют 1 мл этилового спирта для осаждения белков. Содержимое пробирки хорошо перемешивают и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин. Центрифугат сливают в другую пробирку, куда добавляют 0,25 мл диазореактива. Появление розовой окраски свидетельствует о наличии в сыворотке крови непрямого билирубина. Анализ проводят в опытной иконтрольной пробах.
Работа №3. Качественное определение билирубина в моче (проба Розена).
Материальное оснащение:
1. Пробирки простые - 2 шт.
2. Пипетка на 2 мл - 1 шт.
3. Пипетка на 5 мл - 1 шт.
4. Штатив на 5 гнезд - 1 шт.
5. 1% спиртовый раствор йода -10 мл
6. Моча больного желтухой - 20 мл
7. Моча здорового человека - 20 мл
Ход анализа:
В пробирку (опытная проба) наливают 5 мл мочи больного желтухой и на нее наслаивают 2 мл 1% спиртового раствора йода. При наличии билирубина в пробе на границе жидкостей появляется зеленое кольцо.
Аналогичное исследование проводят с мочой здорового человека (контрольная проба).
|
|
Работа №4. Качественное определение уробилина в моче (проба Богомолова).
Материальное оснащение:
1. Пробирки простые - 4 шт.
2. Штатив на 5 гнезд - 1 шт.
3. Пипетка на 1 мл - 1 шт.
4. Пипетки на 5 мл -2 шт.
5. Пипетка на 10 мл - 1 шт.
6. Воронки стеклянные - 2 шт.
7. Фильтровальная бумага - 5 шт.
8. Насыщенный водный раствор
медного купороса - 10 мл
9. Соляная кислота концентрированная - 5 мл
10. Хлороформ медицинский (очищенный) - 20 мл
11. Моча больного желтухой - 20 мл
12. Моча здорового человека - 20 мл
Ход анализа.
К 10 мл профильтрованной мочи прибавляют 3 мл раствора медного купороса. При помутнении жидкости (образуется гидрат окиси меди) добавляют 2-3 капли концентрированной соляной кислоты до просветления жидкости. Через 5 мин прибавляют 3 мл хлороформа; смесь несколько раз встряхивают.
При наличии уробилина в пробе хлороформ окрашивается в интервале от бледно-розового до кирпично-красного цвета в зависимости от концентрации этого пигмента в исследуемой моче.
Одновременно изучают оба (опытный и контрольный) образца мочи.
Результаты всех проведенных анализов сопоставляют и обобщают. Исходя из полученных данных, определяют тип желтухи у обследованного больного. В заключении обсуждаются вероятные механизмы развития выявленного типа желтухи.