Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

ПЦР была открыта в 1986 г. американским биохимиком Кэри Мюллисом. Журнал «Science» назвал это открытие самым выдающимся в биологии последних лет, а Мюллис в 1995 г. был награжден Нобелевской премией. ПЦР позволяет выявить в ис­следуемом материале наличие специфического участка ДНК, ха­рактерного для исследуемого организма, и многократно размно­жить его. В основе метода лежит многократное увеличение числа копий специфического участка ДНК (так называемая направ­ленная амплификация ДНК). Этот процесс катализируется фер­ментом ДНК-полимеразой.

Использование термостабильной ДНК-полимеразы, ис­точником которой служат термофильные бактерии, создает возможности для автоматизации синтеза нуклеиновой кисло­ты in vitro. Очень высокий уровень чувствительности (96%), являющийся главным достоинством метода, достигается за счет того, что в результате многократного копирования уро­вень специфической олигонуклеотидной последовательности в реакционной пробе возрастает в 104 - 108 раз. Специфичность метода 100%, преимуществом является также быстрота полу­чения результатов (2-3 часа). Особенно хорошо пользоваться этим методом для выявления микроорганизмов, являющихся облигатными паразитами. К ним, в частности, относятся хламидийные инфекции.

Методом ПЦР предпочтительно выявлять и персистирующие микроорганизмы. В ходе длительного пребывания в мно­гоклеточном организме в персистирующих бактериальных клет­ках активизируются приспособительные механизмы, направ­ленные, прежде всего, на защиту от агрессивного воздействия на них иммунной системы. Результатом действия этих механиз­мов может быть маскировка или видоизменение антигенных детерминант, выявление которых служит основой иммуноло­гических методов микробиологической диагностики. К числу таких возбудителей относятся микоплазмы и уреаплазмы, вы­явление которых методом ПЦР является наиболее точным. Материалом для исследования при использовании ПЦР-анализа служит любая биологическая среда организма: кровь, сы­воротка, мазки, смывы, слюна, мокрота, желудочный сок, биопсийный материал, соскоб из цервикального канала.

Для определения возбудителей в цервикальном канале уретральным концом ложки Фолькмана или специальным зон­дом одноразового использования для взятия биоматериала пос­ле удаления ватным тампоном слизи производят забор материа­ла с поверхностными клетками цервикального канала. Забран­ный материал переносится в микроцентрифужную пробирку типа Эппендорф, в которую предварительно наливается 0,1 мл 0,9% раствора хлорида натрия. Пробирки и весь инструмент должны быть стерильными. Для исключения контаминации забор материала нужно проводить одноразовыми инструмен­тами, либо, если инструмент многоразовый, его нужно прока­лить на пламени горелки в течение 30—60 с. В замороженном состоянии пробы могут храниться до 2—3 месяцев.

Таким образом, ПЦР-тест является наиболее современным и перспективным в настоящее время.