Выделение и идентификация культур на агаризованных дифференциально-диагностических средах

Культуры через 24 и 48 ч инкубирования пересевают на три агаризованные среды: висмут-сульфит агар, среду Плоскирева и среду Эндо (или среду Левина).

Допускается использование одной чашки каждой из сред для одновременного высева с двух селективных сред.

Посевы инкубируют при температуре (36±1)°С в течение 24 – 48 ч.

После 24 ч инкубирования посевов проводят предварительный учет результатов, а после 48 ч – окончательный.

*После инкубирования посевов отмечают на дифференциально-диагностических средах рост колоний, характерных для бактерий рода Salmonella:

- на висмут-сульфит агаре колонии черные с характерным металлическим блеском, а также зеленоватые с темно-зеленым ободком и с пигментированием среды под колониями;

- на среде Плоскирева колонии бесцветные прозрачные, но более плотные, чем на среде Эндо;

- на среде Эндо колонии круглые бесцветные или слегка розоватые, прозрачные;

- на среде Левина колонии прозрачные, слабо-розовые или розовато-фиолетовые.

При отсутствии в посевах на дифференциально-диагностических средах характерных для бактерий рода Sаlmоnеllа колоний дают заключение об отсутствии бактерий рода Sаlmоnеllа в анализируемой навеске продукта.

При наличии хотя бы на одной дифференциально-диагностической среде характерных для бактерий рода Sаlmоnеllа колоний проводят их дальнейшее изучение.

Биохимическое подтверждение принадлежности выделенных характерных колоний к бактериям рода Salmonella:

Не менее трех характерных колоний с каждой дифференциально-диагностической среды пересевают на скошенную поверхность мясо-пептонного агара или среды из сухого питательного агара, и часть колоний пересевают штрихом на поверхности и уколом в столбик трехсахарного агара. Посевы инкубируют при температуре (36±1)°С в течение 24 ч. Из отобранных для биохимического подтверждения колоний приготовляют мазки и окрашивают по Граму. Бактерии рода Sа1mоnе11а являются грамотрицательными палочками с закругленными концами.

После инкубирования посевов проводят учет результатов ферментации лактозы, глюкозы и сахарозы на трехсахарном агаре:

- пожелтение скошенной части среды указывает на ферментацию лактозы или сахарозы или обоих сахаров;

- пожелтение столбика среды с разрывом агара или пузырьками газа указывает на ферментацию глюкозы с образованием газа, пожелтение столбика среды без разрывов или пузырьков газа указывает на ферментацию глюкозы без образования газа;

- почернение среды в столбике указывает на образование сероводорода.

Типичными для бактерий рода Sа1mоnе11а являются культуры, ферментирующие глюкозу с образованием или без образования газа, не ферментирующие лактозу и сахарозу, образующие сероводород.

Дальнейшему изучению подвергают также лактозоположительные бактерии или бактерии, не образующие сероводород, но обязательно ферментирующие глюкозу с образованием или без образования газа.

У культур, пересеянных предварительно на поверхность мясо-пептонного агара или среды, приготовленной из сухого питательного агара, изучают возможность расщепления мочевины, образования ацетоина и индола, ферментации сахарозы и маннита и подвижность.