Результаты

В здоровой носовой слизистой оболочке экспрессируются и TLR4 и TLR9. Как показано в иллюстрациях 1 (a)-1 (c), TLR4 и TLR9 были обнаружены в уровне подслизистой оболочки (a), назальных желез (b) и на эпителиальном уровне (c).

В частности, экспрессия TLR4 (красное окрашивание), в основном локализована в слизистой, эпителиальном и стромальном уровне (железистых клеток), а TLR9 (зеленая окраска) наблюдалось в подслизистом слое (стромальный уровень).

(a)

(b)

(c)

Рисунок 1: экспрессия TLR4 и TLR9 в здоровой слизистой нижних носовых раковин. Конфокальной анализ показывает экспрессию TLR4 и TLR9 в подслизистом слое (а), носовых железах (б) и на эпителиальных уровне (с). Обратите внимание на выраженную локализацию TLR4 как на эпителиальном так и стромальном уровнях, в то время как TLR9 был локализован только в стромальном уровне. × 60/oil-immersion.

В образцах ткани, полученных от пациентов, страдающих аллергическим ринитом, мы обнаруживали более низкую экспрессию (47.5 % и 48.9 %) и TLR4 и TLR9 рецепторов на стромальном уровне, по сравнению с их уровнями в здоровой слизистой (201,15 ± 16,61 против 382,78 ± 60,44; и 219,05 ± 61,65 против 428,52 ± 116,52;

(а)

(b)

(c)

Рисунок 2: экспрессия TLR4 и TLR9 при аллергическом рините. Конфокальный анализ показывает постоянно низкую экспрессию TLR4 (а, с) и снижение экспрессии TLR9 на стромальном уровне (а) и (б), о чем свидетельствует белая стрелка в (б) × 60/oil-immersion.

Иная картина экспрессии наблюдается в образцах, взятых у пациентов с хроническим риносинуситом. На самом деле, в то время как экспрессия TLR4 был увеличена на 40,1% по сравнению с таковой наблюдаемой у здоровых людей (536,45 ± 123,50 против 382,78 ± 60,44; экспрессия TLR9 снизилась на -23,32% (328,60 ± 41,62 против 428,52 ± 116,52. Эта модель экспрессии TLR (рис. 3 (а) и 3 (б)) была связана с заметным структурным изменением железистого эпителия и массивным воспалительным инфильтратом и показывает прямую TLR4/TLR9 ко-локализацию (на результатах это видно в желто-коричневом цвете в окрашивании панели).

(a)

(b)

Рисунок 3: экспрессия TLR4 и TLR9 при хроническом рините. Конфокальный анализ показывает совместную экспрессию TLR4 и TLR9 (а) и (б). Обратите внимание на сильные структурные изменения железистого эпителия связанные с массивными клеточными инфильтратами также экспрессирующими TLRs. Звёздочка указывает на просвет носовых желез. × 60/oil-immersion.

Аналогичная совместная локализация TLR4/TLR наблюдалось также при вазомоторном рините. Тем не менее, у этого фенотипа экспрессия и TLR4(-39,0%), и TLR9 (-63,4%) были значительно снижена по сравнению со здоровой контрольной группой. (233,51 ± 69,47 против 382,78 ± 60,44 и 157,06 ± 80,56 против 428,52 ± 116,52; соответственно); рисунок 4.

(a)

(b)

Рисунок 4: экспрессия TLR4 и TLR9 при вазомоторном рините. Конфокальный анализ показывает совместную экспрессию TLR4 и TLR9 (а) и (б). Обратите внимание на преобладание желтой окраски указывающей на более выраженную распространенность экспрессии TLR9 по сравнению с TLR4. Звёздочка указывает на просвет носовых желез. × 60/oil-immersion.

Дисперсионный анализ значений распределения плотности экспрессии TLR при аллергическом рините, хроническом риносинусите, вазомоторном рините и у здоровых референтных пациентах показано на рисунке 5.

(a)

(b)

Рисунок 5: ANOVA анализ IntDen встречаемости случаев среди различных подгрупп.

4. Обсуждение.
Это исследование показывает, что TLR4 и TLR9 по-разному выражены в слизистой оболочке носа у здоровых лиц и основных фенотипов ринита. Наши результаты позволяют сделать некоторые предположения о роли TLRs в физиологических условиях и при различных формах воспаления, ответственных за различные формы ринита.

Оба TLR4 и TLR9 экспрессируются в здоровой слизистой оболочки носа. TLR4 в основном присутствует в эпителиальном слое и железистых клетках, в то время TLR9 в основном обнаруживается в стромальном уровне. В подслизистом слое, TLR4 находится в отдельных клетках, а экспрессия TLR9 была широко диффузной. В носовой железах, TLR4 был высоко экспрессирован, а экспрессия TLR9 была снижена. Встречаемость высокой частоты экспрессии TLR4 и TLR9 в здоровой слизистой оболочки носа соответствует функции Толл-подобных рецепторов в качестве первой линии защиты против патогенов [7].

Конфокальной анализ слизистой оболочки носовой полости при воспалении и аллергическом рините показал заметное снижение экспрессии как TLR4 так и TLR9.

TLR4 в основном экспрессируют дендритные клетки, макрофаги и моноциты, а также CD3-положительные Т-лимфоциты в слизистой оболочке носа детей младшего возраста [9, 10]. Было высказано предположение, что воздействие микробных антигенов в раннем возрасте вызывает смещение иммунного ответа на ответ Th1-типа цитокинового профиля, который защищает от развития аллергии и астмы [11]. На самом деле было показано, что воздействие бактериального эндотоксина лиганда-TLR4, находится в обратной зависимости от частоты атопической астмы, сенной лихорадки и сенсибилизирует к воздушным аллергенам у детей школьного возраста [12]. Сельское окружение также связывается с более низкой распространенностью и атопической и не атопической формы астмы, и более частый контакт с домашними животными подразумевает уменьшенный атопический риск [13, 14]. Воздействие LPS (липополисахарид клеточной стенки бактерий) - аллергена привело к торможению аллергического воспаления и бронхиальной гиперчувствительности, хотя воздействие LPS уже после аллергена усугубляется проблему аллергических реакций [15].

Результаты нашего исследования, показывающие снижение экспрессии TLR4 в носовой слизистой оболочке при аллергическом рините, соответствуют результатам, свидетельствующим о низкой экспрессии TLR4 в Т-лимфоцитах, и снижении ответа на липополисахариды при атопических ринитах у взрослых [10, 16].

Богатая микробами окружающая среда также содержит другие иммуностимулирующие антигены, которые действуют как лиганды для TLR2 и TLR9 [17, 18]. В то время как TLR4 специализируется на распознавании антигенов Грамм отрицательных бактерий (LPS), TLR9 распознаёт неметиллированные CpG ДНК бактерий и вирусов, так же как и других нуклеиновых кислот, которые не уникальны для микробного мира [2]. Синтетические иммуностимулирующие последовательности - олигодезоксирибонуклеотиды (ISS-ODNs) активизирует TLR9 и более эффективно, чем действуют стероиды для уменьшения гиперчувствительности при астме, аллергическом конъюнктивите, и аллергическом рините [19, 20]. ISS-ODNs быстро ингибируют активность эффекторных Th2-лимфоцитов и других клеток, которые способствуют избыточному аллергическому ответу [16]. Интересно, что прививка с аллергеном и ISS-ODN- лигандами TLR9 была предложена как перспективный подход в иммунотерапии аллергических болезней [16, 19-22]. Таким образом, наше исследование показывает, что снижение экспрессии TLR4 и TLR9 в слизистой оболочке полости носа у пациентов с аллергическим ринитом может быть связано сTh2-типом аллергического воспаления и повышенной восприимчивостью к инфекции верхних дыхательных путей обычно наблюдаемой у таких пациентов.

При хронических риносинуситах, как мы обнаружили, что экспрессия TLR4 значительно возрастает. Полученные данные соответствуют предыдущим выводам Донга и его коллег, которые наблюдали повышение экспрессии TLR4 при хронических риносинуситах в эпителиальных клетках нижней носовой раковины слизистой оболочки носа, по сравнению со здоровыми взрослыми добровольцами. [23]. Соответственно, You и коллеги, также сообщили о значительном увеличении экспрессии TLR4 в эпителиальных / железистых клетках при хроническом синусите, по сравнению с полипами носа и контроль тканей [24]. С другой стороны, о снижении экспрессии TLR9, наблюдаемом при хронических риносинуситах с носовыми полипами, по сравнению со здоровыми добровольцами, сообщили Ramanatan и его коллеги. [25, 26].

При риносинуситах, конфокальный анализ материала показал четкую локализацию экспрессии TLR4/TLR9 в подслизистом клеточном инфильтрате, связанную с выраженным повреждением эпителия. Эти результаты согласуются с картиной хронического воспаления типичной для риносинусита.

Хотя при вазомоторном рините экспрессия и TLR4 и TLR9 оказалась существенно снижена, их совместная локализации в клеточных инфильтратах оказалась похожей на наблюдаемую локализацию при хронических ринитах, но это снижение в значительно более высокой степени, что означает - минимальное нейрогенное воспаление происходит и в этом, "невоспалительном" фенотипе ринита.

В заключение, наши данные показывают, что картина экспрессии TLR 4 и TLR 9 отличаются у здоровых людей и при разных формах ринита, возможно, в результате вовлечения различных патофизиологических механизмов. Эти данные могут способствовать более точному фенотипированию форм ринита и могут предложить новые терапевтические подходы, основанные на взаимодействии между врожденным иммунитетом и адаптивными эффекторныыми реакциями на аллергены и микробов.

Конфликт интересов.
Все авторы утверждают, что нет конфликта интересов.