Получение посевного материала в лабораторных условиях
Требования техники безопасности при работе с фильтрами.
При проведении работ, связанных с перебивкой головного, угольного и промежуточного фильтра, должны соблюдаться следующие требования:
а) применяется спецодежда и средства защиты – сапоги резиновые, комбинезон х/б, марлевая повязка или респиратор «Лепесток», очки защитные с полугерметической маской, перчатки х/б и брезентовые. Спецодежда и средства защиты должны обеспечить максимум укрытия тела человека;
б) после перебивки фильтра спецодежда должна быть очищена от стекловаты и сдана в стирку;
в) при выгрузке стекловаты из фильтров необходимо непрерывно поливать стекловату (путем разбрызгивания водой);
г) отработанная набивка должна собираться в закрываемом ящике и выноситься сразу после перебивки фильтров;
д) по окончании перебивки работник должен принять душ.
Продуцентом декстрана является культура Leuconostoc mesenteroides СФ-4. Это факультативно анаэробные стрептококки. На жидкой синтетической среде образуют капсулы углеводного происхождения.
водят в два этапа.
1. Выращивание ПМ в пробирках.
Компоненты питательной среды, отвешенные на весах согласно прописи, растворяют в воде для инъекций. Массовая доля сахара в среде должна составлять (9,5±0,5)%, рН – (6,6±0,2). Среду фильтруют через двойной слой фильтровальной бумаги, разливают в стерильные пробирки и стерилизуют в автоклаве. После стерилизации среда должна быть бесцветной и прозрачной.
Простерилизованную среду в пробирках проверяют на стерильность путем выдержки в течение 3 сут. в термостатной камере последовательно при температуре (37,0±0,5)°С, затем при температуре (24,0±0,5)°С. Среда должна оставаться бесцветной и прозрачной.
Поддержание штамма в активном состоянии производят путем пересева культуры один раз в двое суток из пробирки в пробирку на свежеприготовленную среду. Пересев производят при строгом соблюдении асептических условий в специальном боксе, предназначенном только для проведения этих работ. Культуру выращивают в термостатной камере.
Чистоту культуры проверяют один раз в неделю путем высева из пробирок с культурой в мясо-пептонный бульон и на мясо-пептонный агар и микроскопирования мазков из высевов.
Активность культуры проверяют 1 раз в месяц путем выращивания на ферментационной среде в течение 2-х суток при температуре (24,0±0,5)°С с ежедневной проверкой выхода нативного декстрана. Для дальнейшей работы используют пробирки с культурой, давшей наибольший выход нативного декстрана и отвечающей следующим требованиям:
а) внешний вид – мутная густая жидкость;
б) продуктивность штамма – не менее 38,0% к загруженному сахару;
в) морфология культуры – цепочки кокков с капсулами;
г) отсутствие посторонних микроорганизмов.
2. Выращивание ПМ в колбах.
Для выращивания ПМ в колбах вместимостью 1000 мл используют (30±6) часовую культуру Leuconostoc mesenteroides СФ-4, выращенную в пробирках, в количествах (25±1) мл на каждую колбу. Состав среды аналогичный. Посев производят в боксе в асептических условиях. Засеянную среду в колбах поме-
щают в термостат и культивируют (30±6) ч. Для засева инокулятора используют ПМ из колб в количестве 10% к объему среды в инокуляторе (3 колбы по 700 мл). ПМ в колбах должен соответствовать следующим требованиям:
а) внешний вид – мутная густая жидкость;
б) морфология культуры – цепочки кокков с капсулами;
в) отсутствие посторонних микроорганизмов.
В отделении ферментации получают раствор нативного декстрана.
Питательная среда состоит из 10 компонентов: МgSO4, КН2РО4, Na2HPO4, NH4Cl, КCl, соль Мора, парааминобензойная кислота, пептон, сахар и вода для инъекций. Пропись среды приведена в таблице 3.1..
Таблица 3.1. – Пропись среды
Компоненты | Содержание компонентов, г/дм3 | |
для инокуляторов | для ферментаторов | |
КCl | 0,10 | 0,10 |
КН2РО4 | 1,00 | 1,50 |
МgSO4 | 0,10 | 0,10 |
Na2HPO4 | 4,40 | 4,40 |
NH4Cl | 0,50 | 0,50 |
соль Мора | 0,01 | 0,01 |
парааминобензойная кислота | 0,05 | 0,05 |
пептон | 0,20 | 0,30 |
Сахар | 100,00 (глюкоза) | 150,00 (сахар-песок) |
вода для инъекций | остальное | остальное |