Метод оценки обеспеченности витаминами-антиоксидантами

Обеспеченность витаминами – антиоксидантами оценивается по концентрации витамина А и свободных токоферолов (витамина Е) в сыворотке крови флуориметрическим методом на анализаторе биожидкостей «ФЛУОРАТ-02 АБЛФ» фирмы «Люмекс» (Россия). Обеспеченность витамином С в моче оценивали титриметрическим методом (по Тильмансу).

Определение массовой концентрации витамина А в сыворотке крови на анализаторе биожидкости «ФЛУОРАТ-02 АБЛФ»

В две центрифужные пробирки помещается по 1 см³ дистиллированной воды и 1 см³ этанола. В первую поместить 1 см³ исследуемой сыворотки крови (образец №2). Во вторую - 1 см³ дистиллированной воды (образец №1). Встряхивать (аппарат типа «Vortex») 30 сeкунд. Добавить 5 см³ гексана и встряхивать в течение 1 минуты. После встряхивания пробы центрифугировать 10 минут при 1500 об/мин. Четко отделившийся гексановый слой использовать для флуориметрического определения.

Массовую концентрацию витамина А (Х, мкг/см³) в сыворотке крови вычисляют по формуле: , где

С_изм – концентрация витамина А в экстракте (мкг/см³);

V_э – объем экстракта, см³;

V_c – объем сыворотки крови, взятой для анализа, см³;

Q – коэффициент, учитывающий разбавление экстракта.

Критерии оценки обеспеченности витамином А (показатели в пределах нормы):

0,3 – 0,7 мкг/см³

Определение массовой концентрации витамина Е в сыворотке крови на анализаторе биожидкости «ФЛУОРАТ-02 АБЛФ»

В две центрифужные пробирки помещается по 1 см³ дистиллированной воды и 1 см³ этанола. В первую поместить 1 см³ дистиллированной воды (образец №2). Во вторую - исследуемой сыворотки крови 1 см³ (образец №1). Встряхивать (аппарат типа «Vortex») 30 сeкунд. Добавить 5 см³ гексана и встряхивать в течение 1 минуты. После встряхивания пробы центрифугировать 10 минут при 1500 об/мин. Четко отделившийся гексановый слой использовать для флуориметрического определения.

Массовую концентрацию витамина Е (Х, мкг/см³) в сыворотке крови вычисляют по формуле: , где

С_изм – концентрация витамина Е в экстракте (мкг/см³);

V_э – объем экстракта, см³;

V_c – объем сыворотки крови, взятой для анализа, см³;

Q – коэффициент, учитывающий разбавление экстракта.

Коэффициент разбавления равен ,

где Vк- объем разбавленного экстракта, см³;

V _разб.- объем исходного экстракта, взятый для разбавления, см³.

Критерии оценки обеспеченности витамином Е (показатели в пределах нормы):

8 – 12 мкг/см³

Определение содержания витамина С в моче

Определение количества аскорбиновой кислоты в моче дает представление об обеспеченности этим витамином в организма.

Суточная экскреция витамина С с мочой здорового человека составляет 20-30 мг (или 113,55-170,33 мк моль/ сутки). Это количество снижается при острых и хронических инфекционных заболеваниях, особенно у детей.

Для определения обеспеченности витамином С в две конические колбы необходимо отмерить по 10 мл мочи, 10 мл дистиллированной воды и 1 мл (20 капель) 10%-го раствора соляной кислоты. Содержимое каждой колбочки перемешать и оттитровать 0,001 н раствором 2,6-дихлорфенолиндо-фенолята натрия до появления розовой окраски, не исчезающей в течение 30 секунд.

Количество витамина С в моче рассчитывается по формуле:

 

где Х – количество аскорбиновой кислоты в моче (в мг/сутки);

0,088 – коэффициент, отражающий количество аскорбиновой кислоты, эквивалентное 1 мл 0,001 н раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия (в мг);

А – средняя арифметическая результатов титрования 0,001 н раствором краски Тильманса двух проб мочи (в мл);

В – среднее суточное количество мочи (для мужчин – 1500 мл, для женщин – 1200 мл);

Б – объем мочи, взятый для титрования (в мл).

Критерии оценки обеспеченности витамином С:

С мочой у здорового человека экскретируется 20–30 м г витамина С и ли 1 13,55–170,33 мкмоль/сут.