Метод пропорций на плотных средах

Интерпретация результатов

Метод абсолютных концентраций (метод разведений на плотной или жидкой питательных средах)

Методы определения лекарственной чувствительности

Фенотипические:

· Культуральные – при задержке роста на плотных или жидких средах в присутствии антибактериального препарата;

· Молекулярные – без культивирования, например, по маркёрам изменений в метаболизме бактерий;

Генотипические:

· Выявление специфических для каждого антибактериального препарата генных мутаций после амплификации (ПЦР) соответствующего участка ДНК.

Культуральное определение чувствительности М. tuberculosis к противотуберкулёзным препаратам

· Классические методы, такие как метод абсолютных концетраций или метод пропорций, выполняются на плотных средах, содержащих противотуберкулёзные препараты.

· Системы бульонного культивирования ВАСТЕС 460, ВВL MGIT, ВАСТЕС 960, МВ /ВасТ - препараты растворяются в бульоне.

Цель исследования ЛЧ состоит в том, чтобы определить отличается ли клинический изолят от «дикого» штамма МБТ по степени чувствительности к соответствующему антимикробному агенту:

· При оценке результата микробиологического исследования культура МБТ признаётся устойчивой, если микобактерии дают рост на питательной среде в присутствии критической концентрации заключённого в неё противотуберкулёзного препарата.

· Критическая концентрация – это самая низкая концентрация, которая подавляет рост 95% «диких» штаммов МБТ.

· Для каждой среды или системы культивирования подобраны соответствующие критические концентрации препаратов.

Набор пробирок:

· С питательной средой, модифицированной противотуберкулёзными препаратами разных концентраций;

· Контрольной пробирки без препарата;

· Пробирки, содержащей препарат для выявления роста нетуберкулёзных микобактерий.

· Чувствительная культура – при наличии < 20 колоний (при том, что имеется обильный рост на контрольной пробирке без препаратов)

· Устойчивая культура – при наличии > 20 колоний

Принцип: выявление процента бактерий, устойчивых к критической концентрации лекарственного препарата

Метод: сравнение числа колоний, выросших в присутствии лекарственного препарата, с числом колоний в контроле

Критерий оценки: устойчивость – более 1% по сравнению с числом колоний в контроле

Два подхода:

1. Непрямой метод: заражение чистой культурой

2. Прямой метод: заражение мокротой (БК+)

Непрямой тест

· Выполняется с бактериальной суспензией, приготовленной из первично изолированной культуры

· Преимуществом непрямого метода является возможность точно калибровать культуру, используя оптический стандарт мутности, поскольку результаты прямого метода в некоторых случаях не могут быть оценены из-за избыточного или из-за неудовлетворительного роста на контрольной среде без препарата.

Прямой тест

· Предусматривает инокуляцию бактериоскопически положительного материала непосредственно в среду, содержащую противотуберкулёзный препарат

· Преимущество: сокращение времени диагностики

· Недостаток: микробная контаминация, которая более часто наблюдается и может исказить оценку результатов.