Учет результатов и идентификация. Выделение культуры и приготовление бактериальной

Выделение культуры и приготовление бактериальной

Методика проведения исследования

СТАФИтеста 16

Идентификация стафилококков с использо­ванием

Набор СТАФИтест 16 предназначен для идентификации ши­рокого ряда стафилококков и родственных грамположительных кокков (Мicrососus, Stomatococcus и др.).

Система представляет собой планшет, содержащий 6 двухряд­ных вертикальных стрипов с субстратами для определения 16 тестов: уреаза, аргинин, орнитин, бета-галактозидаза, бета-глюкуронидаза, нитраты, фосфатаза, пирролидонилариламидаза, эскулин, сахароза, трегалоза, маннитол, ксилоза, мальтоза, манноза, глюкоза/новобиоцин. Дополнительно к, планшетным рекомендуются бумаж­ные полоски для определения реакции Фогеса-Проскауэра (ВПтест) и определения цитохромоксидазы (ОКСИтест). Набор содержит 10 пластинок и позволяет провести идентификацию 60 культур.

Пластинки СТАФИтест 16 (один двухрядный стрип на каждую культуру), рамка с крышкой, физиологический раствор, парафино­вое масло, диагностические полоски ВПтест и ОКСИтест, реактивы для тестов: фосфатаза, нитраты, ПИРАтест, Фогеса-Проскауэра (ацетоин), оксидаза, стандарт мутности второй степени по шкале МсFarland.

суспензии. Выделяют чистую культуру с кровяного агара. Окрашивают ее по Граму и проверяют каталазную активность. Для идентификации с помощью данной системы используют культуры грамположительных каталазоположительных кокков. Из чистой 24-часовой культу­ры готовят в физиологическом растворе бактериальную суспензию мутностью, соответствующей указанному выше стандарту.

Инокуляция и инкубация. Приготовленную суспензию инокулируют по 0,1 мл во все лунки стрипа, кроме лунки А второго ряда (глюкоза/новобиоцин), в которую вносят 0,1 мл разведенной суспензии. Для этого 0,1 мл исходной суспензии вносят в 2,6 мл физиологического раствора и тщательно гомогенизируют. После инокуляции в лунки Н, G иF (тесты уреаза, аргинин, орнитин) добавляют по две капли парафи­нового масла.

В пробирку с исходной суспензией (примерно 1 мл) помещают диагностическую полоску с ВПтестом. Инокулированную пластинку инкубируют в течение 24 часов, а пробирку с ВПтестом в течение 1,5 часов при температуре 37 °С.

После 1,5 часов инкубации в пробирку с ВПтестом добавляют по три капли реактивов ВПТ1 и ВПТ2, встряхивают и помещают в термостат на 30-40 минут, после чего учитывают результат реакции. После 24 часов инкубации пластинки добавляют по одной кап­ле реактива в следующие лунки первого ряда стрипа: лунка С - реак­тив на нитраты, лунка В - реактив на фосфатазу, лунка А - реактив РYR. Учитывают результаты всех тестов. При оценке СТАФИтест 16 ориентируются по таблице 17 «Интерпретация реакций», цветной шкале и/или цветовым реакциям контрольных штаммов. Для более четких положительных реакций тестов бета-галактозидаза и бета-глюкуронидаза влунки Е и D первого ряда стрипа добавляют по 1 капле реактива на фосфатазу. Как дополнительный тест для группы S. sciuri/lentus и S. caseolyticus ставят
ОКСИтест.

Примечание:

При нечеткой работе теста GLN (глюкоза/новобиоцин) для выясне­ния чувствительности испытуемых штаммов к новобиоцину на кон­трольные чашки с высевом бактериальных суспензий накладывают диагностические диски с этим антибиотиком.