Лабораторная диагностика актиномикоза

Таблица 64 - Дифференциальные признаки видов коринебактерий

Таблица 63 - Дифференциация С. renale, C. pilosum, C. cystitidis

Таблица 62 - Дифференциация коринебактерий и Rhodococcus equi

Биопроба. При заражении мышей культурами С. pseudotuberculosis выявляется вариа­бельность их вирулентности. При внутривенном заражении погибает 90,7% животных, при подкожном — около 21,2%. В результате внутрибрюшинного заражения морских свинок (самцы) можно вызвать орхит.

Питательные среды. Среда Тинсдаля. К 1000 мл расплавленного и охлажденного до 50° С 2%-ного МПА добавляют 120 мл 1%-ного раствора L-цистина на 0,1 N хлористоводородной кислоте, 120 мл 0,1 N раствора гидроокиси на­трия, 18 мл 2%-ного раствора теллурита калия, 18 мл 2,5%-ного ра­створа гипосульфата натрия и 200 мл стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота.

Приготовление раствора теллурита калия. В 100 мл дистиллирован­ной воды растворяют 2 г теллурита калия. Раствор стерилизуют в кипя­щей водяной бане 30 минут и хранят при комнатной температуре. В слу­чае выпадения осадка раствор вновь прогревают в водяной бане.

Таблица 61 - Дифференциальные признаки грамположительных,
не образующих спор, неправильной формы палочек

Признаки	Cory neb ас -terium	Agromyces	Cellulomonas	Oerskovia	Rothia	Actinomyces	Arc anob ас terium	Propiono-bac terium	Arachnia	Cardnerella
Морфология клетки	Палочки булавовид­ной формы	Ветвящиеся, нитевидные формы	Неправильные палочки, кок­ковые формы	Ветвящиеся гифы, па­лочковид­ной формы	Неправильные палоч­ки, нити, кокковид-ные формы	Палочки, нити, ветвящиеся струк­туры	Короткие непра­вильные палоч­ки, могут доми­нировать кокко-видные формы	Неправильные палочки, вет­вящиеся и кок-ковидные фор­мы	Палочки, нити, вет­вящиеся структуры	Неправильные палочки
Окраска по Граму +	+	+ '	+	+	+	+	+	+	-
Отношение к кислороду:	Строгий аэроб Р	X	-	-	-	-	-	-	-	-
Факультативный анаэроб или мик-роаэрофил Р	X	+	+	+	+	+	Р	+	+
	Строгий анаэроб	-	-	-	-	-	-	-	Р	-	-
Подвижность	-	_	Р	X	-	-	-	-	-	-
Каталаза	+	-	+	+	+			+ 4	-	-
Место обитания и па­тогенные свойства	Человек, животные и др. ис­точники. Есть виды, патогенные для живот­ных и че­ловека	Почва	Почва, гнию­щие растения	Почва, гниющие растения, другие ис­точники	Ротовая полость; оппортунистический патоген человека	Млеко питающие; большинство па­тогенны для жи­вотных и человека	Животные, чело­век; патогенны для человека и животных	Продукты, ко­жа человека, клинический материал. Есть патогенные для человека	Ротовая полость и др. мате­риалы от человека. Может быть пато­генней для человека	Генитальный и мочеполовой тракты
1 - Возможно быстрое обесцвечивание; 2 - Возможно появление грамотрицательных клеток, но более типична вариабельность; некоторые штаммы дают положительную реакцию; 4которые штаммы дают негативную реакцию; штаммов имеют положительный признак; признак различен в рангах (вида, рода, семейства).

Признаки	C.bovis	C.kurtscheri	С.pseudo­tuberculosis	C.renaie группа	R.equi
β-гемолиз	-	V	-	-	-
Гидролиз эскулина	-	+	-	-	-
Редукция нит­ратов	-	+	V"	V	+
Уреаза	-	+	+ (>18ч)	+ (<1ч)	+ (>18ч)
Разжижение желатина	-	-	-	V	-
Глюкоза	+	+	+	+	-
Мальтоза	-	+	+	-	-
Сахароза	-	+	-	-	-

+ положительная реакция; - отрицательная реакция; v - варьирующий признак;

v"- штаммы, выделенные от лошадей позитивные, от овец - негативные.

Признаки	C.renaie	C.pilosum	C.cystitidis
Цвет колоний	Желтый	Желтый	Беловатый
Срок появления макроскопически видимых колоний при 37° С		24 ч	48 ч
Образование кислоты из:
ксилозы	-	-	+
крахмала	-	+	+
Редукция нитратов	-	+	-
Разжижение казеина	+	-	-
Гидролиз твина-80	-	-	+
Рост в бульоне с рН 5,4	+	-	-

Признаки	C.diphteriae	C.pseudotuberculosis	C.xerosis	C.pseudodiphteriticum	C.kurtscheri	C.minutissi mum	C.striatum	C.renale	C.cysticus
Гидролиз	эскулина	-	-	-	-	-	нд	-	-	-
гиппурата	-	-	+	+	+	+	+	+	+
желатина		X	-	-	-	-	х2	-	-
Уреаза		+	-	+	+	-	-	+	+
Фосфатаза	-	-	-	-	-	+	+	-	-
Расщепление тирозина	-	-	-	-	-	нд	+	-	-
Метилрот	+	+	-	-	-	-	+	-	-
Расщепление казеина	-	-	-	-	-	-	-	+	-
Редукция нитратов	+ 3	X	+	+	+	-	-	-	-
Образование кислоты из:	глюкозы	+	+	+	-	-	+	+	+	+
арабинозы	+	X	-	-	-	нд	-	-	-
ксилозы	-	-	-	-	-	-	-	-	+
рамнозы	+	-	-	-	-	НД	-	-	-
фруктозы	+	+	+	-	+	+	+	+	+
галактозы	+	+	+	-	-	нд	4 X	-	-
маннозы	+	+	4 X	-	+	X	+	+	-
лактозы	-	-	-	-	-	-	X	-	-
мальтозы	+	+		-	+	+	+	X	+
сахарозы		X	+	-	+	+4		-	-
трегалозы				-	X	-	X	X	+
раффинозы	X	-	-	-	-	-	-	-	-
салицина	+	-	+	-	+	нд	-	-	-
декстрина	+	X	-	-	+	нд	+	+	+
крахмала	X	-	-	-	+	-	+	-	+

Признаки	C.pulosum	C.mucetoides	C.matruchotii	C.flavescens	C.vitarumen	C.glucamicum	C.callunac	C.bovis	C.paurometobolum
Гидролиз	эскулина	-	-	+	нд	+	-	-	-	+
гиппурата	+	нд	+	-	-	+	+	+	-
желатина	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Уреаза	+	-	х2	-	+	+	+	-	-
Фосфатаза	-	+	-	-	-	нд	нд	+	+
Расщепление тирозина	-	нд	нд	нд	нд	нд	нд	-	-
Метилрот	-	-	-	+	+	+	+	-	-
Расщепление казеина	-	нд	НД	нд	нд	-	-	-	-
Редукция нитратов	+	-	+	-	+	+	-	-	-
Образование кислоты из:	глюкозы	+	+	+	+	+	+	+	+	-
арабинозы	-	-	-	-	нд	-	-	X	-
ксилозы	-	-	-	-	нд	-	-	-	-
рамнозы	-	нд	-	-	нд	-	-	-	-
фруктозы	+	нд	+	+	+	+	+	+	-
галактозы	-	-	-	+	+	-	-	+	-
маннозы	+	-	+	+	+	+	+	-	-
лактозы	-	-	-	-	-	-	-	X	-
мальтозы +		-	+	-	+	+	+	+	-
сахарозы -		нд	+	-	+	+	+	-	-
трегалозы	+	X	-	-	+	+	+	X	-
раффинозы -		-	5 X	-	нд	-	-	-	-
салицина -		нд	+	-	+	-	+	-	-
декстрина	+	-	+	-	нд	-	-	X	-
крахмала	+	нд		-	-	-	-	-	-

' Исключение — тип ulcerans; ² около 50% штаммов положительны; ³ тип ulcerans может быть отрицательным; ⁴ некоторые штаммы отрицательные; ⁵ некоторые штаммы положительные; нд — нет данных; х — 11-89% штам­мов положительные.

Приготовление раствора гипосульфита натрия. Раствор готовят на стерильной дистиллированной воде. После добавления каждого ком­понента среду тщательно перемешивают и, не стерилизуя, разливают по чашкам Петри. До использования среду можно хранить при 10° С не более 3-4 суток.

Среда предназначена для дифференциации возбудителя дифтерии и дифтероидов. Коринебактерии дифтерии образуют колонии черного цвета, т.к. способны продуцировать сероводород из цистина, взаимодействующий с солью теллурита. С. diphtheriae var. gravis на этой среде образует мелкие, выпуклые, блестящие, черные колонии. Среда обладает селективными свой­ствами, посторонняя микрофлора растет слабо.

Теллуровая среда Клауберга II. К 1000 мл рас­плавленного 3%-ного питательного агара прибавляют 3 мл 2%-ного ра­створа теллурита калия, 10 мл глицериновой смеси и 50 мл «лаковой кро­ви». Среду разливают в чашки Петри (используют не более 3-4 суток) и хранят при 4-10° С. Коринебактерии дифтерии типа «gravis» образуют серовато-черные колонии с несколько изрезанными краями, типа «mitis» — мелкие, с ровными краями серовато-черные блестящие колонии.

Приготовление «лаковой крови». К 3 мл стерильной дистиллированной воды добавляют 16 мл дефибринированной крови крупного рогатого ско­та, добавляют 20 мл химически чистого стерильного глицерина. Смесь вы­держивают в холодильнике 3-6 недель.

Кровяной теллуровый агар. К 100 мл рас­плавленного и охлажденного до 45-50° С питательного агара (рН 7,6-7,8) добавляют 10 мл дефибринированной крови лошади или крупного ро­гатого скота, 2 мл 2%-ного раствора теллурита калия (К,ТеО₃). Получен­ную среду перемешивают и разливают в чашки Петри. Колонии дифтерийных бактерий на этой среде имеют черный цвет или черный центр колонии, дифтероидов — более выпуклые, влажные, серого цвета, с коричневым центром, ложнодифтерийных бактерий — мелкие се­рые, с коричневым центром, непрозрачные.

Среда Пергола. Используют как среду обогащения для выделения коринебактерии дифтерии. Из куриного яйца стерильно извлекают желток, переносят его в колбу с бусами и добавляют 100 мл стерильной сыворотки крови лошади или круп­ного рогатого скота, 1 мл 2%-ного раствора теллурита калия; тщательно перемешивают. Полученую смесь разливают по 2-3 мл в стерильные про­бирки и прогревают 1 ч в водяной бане при 56° С. Затем для контроля сте­рильности выдерживают 48 ч в термостате при 37° С. На этой среде дифте­рийные бактерии формируют через 12-
15 ч инкубирования светло- или темно-серые влажные колонии.

Жидкая среда для дифтерийных микробов. К 400 мл сте­рильного бульона (рН 7,6), содержащего 10% сыворотки лошади или крупного рогатого скота, добавляют 75 мл «лаковой крови», 20 мл 1%-ного раствора теллурита калия, 12,5 мл глицериновой смеси и 12,5 мл 1%-ного цистина.

Ацетатно-теллуритовый бульон для дифтерийных микробов. В колбе смешивают 200 мл МПБ (рН 7,4), 2 мл глицерина, 18 мл 50%-ного раствора пептона Витте и 0,63 мл 50%-ного раствора ацетата натрия. Среду стерилизуют текучим паром в течение 1 ч, охлаждают до 48° С и добавляют 10 мл 1%-ного раствора теллурита калия и 21 мл дефибриниро­ванной крови барана.

Желточно-молочно-агаровая среда. К 1000 мл 4%-ного агара на мартеновском бульоне или МПБ (рН 7,6-7,8) добавляют 10 куриных желтков, эмульгируют и вносят 800 мл обезжирен­ного, стерильного молока. Компоненты перемешивают, готовую среду раз­ливают по стерильным пробиркам, скашивают и дважды по 1 ч прогревают в аппарате Коха при 80° С.

Среда Пай. В колбе смешивают 1000 мл содержимого куриных яиц и 500 мл дистиллированной воды, взбивают, фильтруют через двойной слой марли, добавляют 120 мл глицерина, 5 г декстрозы, перемешивают, разли­вают по стерильным пробиркам, скашивают и стерилизуют как свернутую сыворотку (см. среда Леффлера).

Индикаторная среда III для дифтерийных бактерий. К 420 мл 3%-ного питательного агара добавляют 12,5 мл 1%-ного ра­створа цистина, 1,5 мл 50%-ного раствора ацетата натрия, 880 мл 1%-ного раствора теллурита калия. Устанавливают рН 8,0 и вносят 60 мл 2%-ного раствора индикатора водного голубого. В нагретую до 50-55° С среду добавляют смесь следующего состава: 280 мл дистиллиро­ванной воды, 21 мл глицериновой смеси (см.среда Клауберга II), 15 г глюкозы, 140 мл дефибринированной крови (рН смеси 7,0). После пере­мешивания среду разливают в чашки Петри.

Сывороточная среда Леффлера. Рекомендуется для выращивания пато­генных нейссерий, коринебактерии. Смешивают 750 мл сыворотки крови овцы, 250 мл МПБ (рН 7,0), 2,5 г декстрозы, 1,25 г натрия хлорида. Среду разливают в пробирки и свертывают в скошенном положении при 80° С 3 дня по 2ч в аппарате Коха или в сушильном шкафу при 70° С 3 дня по 1 ч.

Большинство видов бактерий рода Actinomyces патогенны для животных и человека. Основные патогенные виды следующие: A.bovis — возбуди­тель актиномикоза крупного рогатого скота, естественной средой обита ния предположительно являются слизистые ротовой полости или кишеч­ник; A.suis вызывает у свиней актиномикоз молочной железы; A.israelii — основной возбудитель актиномикоза человека, может быть причиной эн­дометритов, цервицитов и конъюнктивитов, ассоциируется с актиномикозом крупного рогатого скота и свиней, естественное место обитания — ротовая полость, слизистые кишечника людей; A.pyogenes — вызывает гнойные процессы у животных, в том числе маститы коров, перитониты у свиней, естественной средой обитания являются слизистые оболочки; A.viscosus — возбудитель актиномикоза собак; A.hordeovulneris — вызы­вает у собак абсцессы, плевриты, перитониты, артриты. Лабораторная диагностика болезней, вызываемых перечисленными видами бактерий, основана на результатах бактериологического исследования.