Бактериологическое исследование. Таблица 100 - Патогенные свойства хламидий

Таблица 100 - Патогенные свойства хламидий

Методы диагностики, позволяющие четко дифференцировать виды хла­мидий у животных, пока в полном объеме недоступны диагностическим лабораториям. Наиболее перспективным методом видовой идентификации хламидий представляется в этом плане полимеразная цепная реакция.

Лабораторная диагностика хламидиозов основана на детекции возбу­дителя в ПЦР, микроскопическом обнаружении клеток возбудителя в окрашенных мазках, идентификации в препаратах из исследуемого материа­ла при помощи серологических реакций (МФА, ELISA), выделении возбу­дителя путем заражения куриных эмбрионов и лабораторных животных с последующей идентификацией хламидий в органах и тканях при помощи вышеуказанных методов, а также на результатах исследований сывороток крови в серологических реакциях. Работы по диагностике антропозоонозных хламидиозов проводят только в лабораториях, которые имеют специ­альное разрешение режимной комиссии СЭС.

В случае абортов берут кусочки плаценты, абортированные плоды целиком или паренхиматозные органы, а также сычуг, образцы влагалищной слизи не позднее 1-2 дней после аборта. Образцы слизи отбирают ватно-марлевыми тампонами, которые потом помещают в пробирки с физиологическим раство­ром, содержащим 500 мкг/мл стрептомицина. При наличии конъюнктивитов соскобы с конъюнктивы берут затупленным скальпелем с предварительной ее обработкой 0,5% раствором дикаина, готовят мазки, фиксируют для ок­раски по Романовскому-Гимза или МФА и иммунопероксидазным методом. От павших или вынужденно убитых животных отбирают кусочки па­ренхиматозных органов, лимфатических узлов, образцы слизи носовой по­лости, трахеи, тонкого отдела кишечника, головного мозга и мозговых оболочек. При наличии у больных животных артритов направляют также синовиальную жидкость. У животных-производителей принудительно по­лучают пробы эякулята. Материал для исследования берут в первые два часа после гибели или аборта животного. Флаконы с материалом помеща­ют в термос со льдом и доставляют в лабораторию не позднее 24 часов после взятия. Оптимальным является помещение и доставка материала в термосе со льдом в специальной транспортной среде Spenser&Jonson (1983): сахароза — 74,6 г; КН₂Р0₄ — 0,512 г; К₂НР0₄ — 1,237 г; L-глутаминовая кислота — 0,721 г; феноловый красный — 0,015 г; ванкомицин — 100 мг; нистатин — 50 мг; стрептомицин —100 мг; гентамицин — 50 мг; дистилли­рованная вода — 1000 мл. При помощи КОН устанавливают рН 7,0 и сте­рилизуют фильтрацией. Среду разливают по 4 мл во флаконы и хранят при -20° С. В этой среде хламидий остаются жизнеспособными при комнатной температуре до
30 дней, при 4° С — до 34 дней. Для таких же целей мож­но использовать среду 199 с 5% фетальной сыворотки крови крупного рогатого скота или сахарозо-фосфатный буферный раствор с фетальной сывороткой (5-10%), с добавлением стрептомицина (100-200 мкг/мл), нистатина (25 мкг/мл), канамицина (100 мкг/мл). Возможна иная комби­нация антибиотиков: гентамицин — 20 мкг/мл, нистатин — 25 мкг/мл, ван комицин —100 мкг/мл. Реакцию сред устанавливают 7,0-7,1. Сахарозо-фосфатный буфер готовят по следующей прописи: 1-й раствор содержит 68,46 г сахарозы в 100 мл дистиллированной воды, 2-й раствор — 2,088 г безводной соли К₂НР0₄ в 60 мл дистиллированной воды, 3-й раствор — 1,088 г безводной соли КН₂Р0₄ в 40 мл дистиллированной воды. Все три раствора объединяют, доводят объем дистиллированной водой до 1000 мл, соляной кислотой доводят рН до 7,0-7,1, стерилизуют при 115° С в тече­ние 15 минут, хранят при 4° С.

Для серологических исследований берут с интервалом в две недели пар­ные пробы крови от клинически больных или подозрительных по заболева­нию животных.