Глава 9. Трансгенные растения

ПОЛУЧЕНИЕ ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЙ И ЖИВОТНЫХ.

ГОСУДАРСТВЕННОЕ РЕГУЛИРОВАНИЕ

БЕЗОПАСНОСТИ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ

Трансгенные растения

Липосомы – это сферические образования, состоящие из фосфолипидов. Упаковка рекомбинантных ДНК в липосомы позволяет защитить генетический материал от разрушающего действия нуклеаз, находящихся в клетках (9.1.1). Для введения ДНК в клетки растений наиболее пригодны липосомы, состоящие из фосфатилсерина и холестерина.

Для получения протопластов: 1. Клетки растений обрабатывают веществами, ингибирующимисинтез клеточной стенки. 2. После слияния гибридные протопласты помещают в среду, в которой нет ингибитора синтеза клеточной стенки, и клетки начинают нормально развиваться. Методы введения ДНК:

1. Микроинъекцию ДНК в протопласты осуществляют микроиглой диаметром 2 мкм (рис. 9.1.2).

3 4

Рис. 9.1. Схема микроинъекции ДНК в протопласты

2. Метод электропорации предполагает создание специальных пор в клеточной мембране реципиентной клетки с помощью пульсирующего электрического поля. Через эти поры в клетку могут входить ДНК, РНК, белки и т. д.

3. Иногда используют векторы на основе ДНК-содержащих вируса растений.

4. Бомбардировка микрочастицами, или методбиологической баллистики, основан на «вбрасывании» частиц вольфрамата (диаметр 0,6-1,2 мкм) в клетки суспензионных или каллусных культур с напылением на них ДНК- вектора с генетической конструкцией.

В качестве вектора при переносе генов в растения используется Ti-плазмида Agrobacterium tumefociens – почвенной бактерии, вызывающей корневой рак у двудольных растений. Ti-плазмида способна встраиваться в растительные хромосомы и переносить гены, необходимые для трансформации растительных клеток в двудольные растения.