Возбудители туберкулеза. Среда Петраньяни. К 150 мл цельного молока при помешивании добавляют 6 г картофельной муки, 1 г пептона и одну мелко изрезанную картофелину ве­личиной с

Среда Петраньяни. К 150 мл цельного молока при помешивании добавляют 6 г картофельной муки, 1 г пептона и одну мелко изрезанную картофелину ве­личиной с куриное яйцо. Смесь кипятят на водяной бане до образования клей. стера, охлаждают до 50 С, добавляют 4 куриных яйца и еще один желт перемешивают. Приливают 12 мл глицерина и 10 мл 20%-ного стерильного водного раствора малахитовой зелени и перемешивают. Фильтруют через два слоя и, разливают по пробиркам, скашивают и в таком положении стерилизуют в аппарате для свертывания сывороток при 85⁰С в течение двух дней по 30 мин или один раз при 90⁰С в течение 1 ч.

Для проверки стерильности пробирки со средой выдерживают в термостате 2 дня, после чего их закрывают резиновыми колпачками - во избежание подсыхания среды и хранят до употребления.

Среда Левенштейна - Йенсена. 1. Навески: одноосновного фосфата калия: 2,4 г, сульфата магния (MgS0₄• 7Н₂О) 0,24, цитрата магния 0,6 г, l-аспарагина 3,6; глицерина х.ч. 12 г растворяют в указанной последовательности в 200 мл дистиллированной воды, доводят такой же водой объем раствора до 600 мл и стерилизуют текучим паром 2 ч. По охлаждении в него добавляют 30 г картофельного крахмала, растворяют при легком подогревании, разливают в колбы 150 мл выдерживают в кипящей водяной бане при постоянном поме­шивании до загустения. Затем стерилизуют при 0,5 ати 30 мин.

2. 20 стер ильных свежих (диетических) яиц обрабатывают способом, указанных разделе Возб­удитель туляремии, асептически выпускают их содержимое в литровую колбу с бусами, тщательно перемешивают и фильтруют через два слоя марли на воронки. К 1 л яичной массы добавляют 2 %-ного стерильного раствора малахитовой зелени и осторожно перемешивают.

Крахмально-солевой раствор (600 мл) подогревают до 55-50 С и смешивают с яичной массой, избегая появления пузырьков воздуха, а если они появились, то выдерживают 1 ч до их исчезновения. Затем среду разливают асептично, в пробирки по 7-10 мл скашивают и в таком положении свертывают в аппарате для свертывания сывороток, как и среду Петраньяни.

Готовую среду выдерживают в термостате 48 ч для проверки стерильности. В среде на дне пробирок должно остаться немного конденсата. При его отсутствии в пробирки добавляют асептически по 0,5-1,0 мл 4%-ного раствора глицерина или 5%-ного раствора глюкозы, или физиологического раствора (растворы­ должны быть стерильны). Во избежание высыхания конденсата пробки пробирок парафинируют. Среду хранят при 2-6⁰С не более 14 дней.

При небольшом расходе среды массу компонентов соответственно уменьшают.

Среда Гельберга. Состав: снятое молоко, картофельный отвар, солевой раствор, яйца, краска малахитовая зелень, лимонная кислота.

Подготовка компонентов:

Цельное молоко в стерильной посуде отстаивают сутки в холодильнике, удаляют сливки и разливают по 110 мл в колбы. Стерилизуют текучим паром дважды, в первый день 15 мин, во второй - 10 мин;

2) картофель моют мылом со щеткой, промывают в проточной воде, очи­щают, вновь промывают, отвешивают 1 кг и кипятят 15 мин в 2 л водопровод­ной воды. После отстаивания отвар сливают, пропускают через ватно-марлевый фильтр, разливают по 110 мл и стерилизуют одновременно с нижеуказанными компонентами 3 и 4 в автоклаве следующим образом: доводят давление до 1 ати, после чего аппарат выключают и, спустив пар, дают остыть в закрытом положении;

3) в 1 л дистиллированной воды растворяют 1 г двузамещенного фосфата калия, 1 г цитрата натрия, 1 г сульфата магния, 5 г пептона и 30 мл глицерина. Стерилизуют так же, как картофельный отвар;

4) 10 г лимонной кислоты растворяют в 90 мл дистиллированной воды. Сте­рилизуют так же;

5) 2 г малахитовой зелени растворяют в 100 мл дистиллированной воды и стерилизуют при 0,5 ати 30 мин.

Непосредственно перед составлением среды 10 свежих диетических яиц обра­батывают, как указано в разделе Возбудитель туляремии, и стерильно вылива­ют в колбу содержимое 6 яиц целиком и 4 желтка. Добавляют по 100 мл мо­лока, картофельного отвара и солевого раствора, 7,5 мл краски малахитовой зелени и 5 мл 10%-ной лимонной кислоты. Содержимое колбы. хорошо пере­мешивают, разливают в пробирки по 4-5 мл, скашивают и в таком положении свертывают в аппарате для свертывания сывороток при 85⁰С 2 дня по 30 мин или однократно при 90⁰С в течение 1 ч. При отсутствии конденсата в пробирки асептически вливают по 0,5 мл солевого раствора (см. выше) и парафинируют пробки. Хранят при 2-6⁰С не более 14 дней.

Жидкая полусинтетическая среда. Состав: одноосновной фосфат калия (КН₂РО₄) - 1,5 г, двуосновной фосфат натрия (NazHPO.· 2H_zO) - 2,5 г, суль­фат магния (MgS0₄·7H₂0) -0,5 г, цитрат натрия-l,5 г, цитрат аммиак-желе­за - 0,05 г, l-аспарагин - 1 г, глицерин х. ч. - 30 мл, дистиллированная вода до 1 л.

В колбе на 1 л подогревают на водяной бане (70⁰С) 500 мл дистиллиро­ванной воды и растворяют в ней поочередно указанные компоненты. Объем раствора доводят до 1 л, пропускают через бумажный фильтр, устанавливают рН 7,0-7,2 и разливают в колбы по 50 или 100 мл. Стерилизуют при 1 ати 30 мин. готовую среду можно хранить при 2-6⁰С до 6 месяцев.

Перед посевом среду разливают в пробирки по 2 мл и стерилизуют при 1 ати 20 мин. По охлаждении в каждую пробирку асептически добавляют по 0,2 мл нативной бычьей сыворотки - и по 0,3 мл раствора пенициллина, содер­жащего 100-150 ЕД/мл. Концентрация пенициллина 12-18 ЕД/мл среды.

Кровяная среда Школьниковой. В колбу с 10 мл 5%-ного стерильного вод­ного раствора цитрата натрия берут асептическн 50 мл крови барана и переме­шивают. Кровь стерильно переливают в колбу со 150 мл дистиллированной во­ды и вновь перемешивают. После гемолиза эритроцитов лаковую кровь разлива­ют в пробирки по 5 мл (лучше по 2-3 мл). При соблюдении стерильности сре­ду можно хранить на холоду до 7 дней.

«Новая» среда по Мордовскому.» Состоит из равных объемов желточной мас­сы куриных яиц и питательного раствора.

Приготовление раствора. Однозамещенный фосфат калия 1 г, цитрат натрия 1 г, сульфат магния 1 г, гликокол 4 г, глицерин 70 мл в указанной последова­тельности растворяют в 500 мл горячей дистиллированной воды, доводят ею объем раствора до 1 л и перемешивают. Раствор в объемах 100 или 200 мл разливают в стерильные флаконы и автоклавируют, доводя давление до 1,5 ати, после чего сразу же выключают автоклав и спускают пар. Хранят при 2-6⁰С до 4 месяцев.

Приготовление желточной массы. Свежие диетические яйца обрабатывают, и желтки собирают, как описано в разделе Возбудитель туляремии. Измеряют объем желтков, вносят их в колбу с бусами и встряхивают. На каждые 100 мл массы добавляют по 3,5 мл 2%-ного стерильного водного раствора малахитовой зелени и перемешивают.

К желточной, массе добавляют равный объем питательного раствора, тща­тельно перемешивают и разливают в пробирки по 4-5 мл с помощью большой стерильной воронки, па которую надета резиновая трубка со стеклянным нако­нечником и зажимом. Среду свертывают в скошенном положении при 85⁰С в течение 50 мин. После свертывания на дне пробирки должен собраться кон­денсат; если его нет, в пробирки добавляют по 5-6 капель питательного рас­твора.

До употребления среду можно хранить не более 3 недель. В плотно завер­нутых и обвязанных целлофановых пакетах Прi1 содержании в холодильнике среда годна к использованию до 3 месяцев.

Среды с туберкулостатиками. Плотные среды готовят на основе од­ной из сред: Петраньяни, Гельберга или Левенштейна - Йенсена. Перед сверты­ванием среду разливают по 50 мл в стерильные колбы с бусами. Число колб должно соответствовать общему числу разведенный испытуемых туберкулоста­тических препаратов. В каждую колбу вливают определенный раствор препара­та и тщательно перемешивают. Затем среду разливают в пробирки по 5 мл и свертывают в скошенном положении при 85⁰С в течение 1 ч.

Туберкулостатические препараты за несколько часов до приготовления сре­ды разводят стерильной дистиллированной водой по следующей схеме, состав­ленной из примерного расчета на 10 испытуемых культур.