2014-02-17
1548
Микроскопическое исследование исходного материала
Бактериологическое исследование
Питательные среды такие же как и при лабораторной диагностике актинобациллезной пневмонии свиней.
A. рleuropneumoniae
Таблица 74 - Критерии дифференциации Н. parasuis и
Биопроба. Для определения патогенных свойств вьделенной культуры используют внутрибрюшинный способ заражения морских свинок. Исследуемую культуру выращивают 24 часа на «шоколадном агаре», смывают стерильным физиологическим раствором, устанавливают концентрацию бактерий по оптическому стандарту мутности на уровне 20 ед. Взвесь в дозе 1 мл вводят трем морским свинкам внутрибрюшинно. Гибель в течение 5 суток хотя бы части животных, выявление у погибших морских свинок поражения серозных оболочек и выделение в результате бактериологического исследования исходной культуры позволяют рассматривать ее как вирулентную.
| Признаки | Н. parasuis | A.pleuropneumoniae |
| Морфология клетки | Преимущественно палочковидные | Преимущественно коккобактерии |
| Уреаза | - | + |
| β-гемолиз | - | + |
| САМР-тест 1) | - | + |
| альфа-фукозидаза | + | - |
| Образование кислоты из: Д-ксилозы 2) Д-маннита | - - | + + |
1)—методика САМР-теста изложена в разделе «Стрептококкозы».
|
|
|
2)-в питательные среды необходимо для роста возбудителя добавлять NAD
(10 мкгл/мл) или дрожжевой экстракт (10%).
Лабораторная диагностика гемофилеза кур
Гемофилез кур (инфекционный насморк, кориза) — инфекционная болезнь, характеризующаяся катаральным воспалением слизистых оболочек носовой полости, подглазных синусов, конъюнктивы. Часто наблюдается смешанное течение гемофилеза и микоплазмоза. Восприимчивы куры всех возрастов, но наиболее — 1-16-недельного возраста, 3-5-дневные цыплята устойчивы. Возбудитель — бактерия Haemophilus paragallinarum, род Haemophilus, семейство Pasteurellaceae. Лабораторная диагностика основана на результатах бактериологического исследования.
Стерильным ватным тампоном собирают слизь и экссудат из полостей синусов, пробы экссудата из трахеи и воздухоносных мешков. Материал берут от 2-3 кур, не подвергавшихся лечению антибиотиками, на стадии острого течения (1-2-е сутки проявления клинических признаков). Материал транспортируют в термосе со льдом.
Из проб материала готовят мазки, окрашивают по методу Грама и одним из методов для выявления капсулы. В мазках из исследуемого материала H.paragailinarum имеет форму небольших, нередко коккоподобных грамотрицательных палочек, окруженных капсулой.
Культивирование. Возбудитель — факультативный анаэроб, температурный оптимум 37-38°С, рН 7,2-7,6, проявляет потребность при культивировании в NAD, сыворотке крови (лучше использовать куриную сыворотку), повышенном содержании СО2 в атмосфере.
|
|
|
Исследуемый материал высевают на 10%-ный кровяной агар в чашках Петри (кровь овцы, кролика, курицы, крупного рогатого скота) с последующим посевом «культуры-баккормилки» (стафилококк, кишечная палочка). Можно использовать кровяной агар Левинталя, сывороточно-дрожжевой агар. Поскольку материал обычно контаминирован сопутствующей микрофлорой, целесообразно применять селективные пи-тательные среды. Посевы инкубируют при 37-38° С в течение 24-48 часов в эксикаторах в атмосфере 10% СО2.
На кровяном агаре с «баккормилкой» возбудитель формирует вокруг штриха питающей культуры мельчайшие сателлитные, негемолитические колонии. На «шоколадном агаре», агаре Левинталя и сывороточно-дрож-жевом агаре через 48 часов культивирования возбудитель формирует круглые, выпуклые, с гладкой поверхностью, полупрозрачные, сероватые, диаметром до 1 мм колонии. В жидких питательных средах возбудитель растет со слабым равномерным помутнением питательной среды.
Морфология клеток возбудителя в культуре. В мазках из подозрительных колоний, бульонных культур клетки H.paragailinarum имеют форму коккобактерии, полиморфных палочек, нитей, грамотрицательные, жгутиков нет. При окраске по методу Гинса или другими методами обнаруживается капсула.
Идентификация H.paragailinarum на уровне рода и вида. Для отнесения выделенной культуры к роду Haemophilus используют те же критерии, что и для Н. parasuis. Основную сложность в процессе идентификации представляет дифференциация Н. paragallinarum и Pasteurella avium (прежнее наименование Haemophilus avium). P. avium no морфологическим, тинкториальным, культуральным признакам сходна с Н. paragallinarum и также зависит от V-фактора.
С целью дифференциации двух указанных видов бактерий у выделенных культур исследуют зависимость роста от наличия сыворотки крови, образование пигмента, способность синтезировать каталазу, фосфатазу, расщеплять трегалозу, галактозу, мальтозу, маннит, сорбит, сахарозу, па-тогенность для кур (см. табл. 75).
