Реакция нейтрализации

В основе этой реакции лежит способность специфических антител нейтрализовать токсическое действие антигена.

Роль антигена может выполнять микробный экзотоксин. В этом случае обезвреживание токсина в ходе физико-химической реакции нейтрализации происходит за счет связывания его свободных аминогрупп, что приводит к потере токсичности.

Для проведения реакции исследуемый материал, в котором предполагается наличие экзотоксина, смешивают с антитоксической сывороткой, выдерживают в термостате и вводят животным (морским свинкам, мышам). Контрольным животным вводят фильтрат исследуемого материала, не обработанный сывороткой. В том случае, если произойдет нейтрализация экзотоксина антитоксической сывороткой, животные опытной группы останутся живыми. Контрольные животные погибнут в результате действия экзотоксина.

Если антиген – вирусный материал, антитела нейтрализуют инфекционное и цитопатическое действие вирусов в чувствительных к вирусу живых системах.

Реакция нейтрализации инфекционного и цитопатического действия вирусов воспроизводится в чувствительных к вирусу живых системах. Из материала, содержащего вирус, готовят серийные разведения и добавляют к ним специфическую сыворотку в разведении в соответствии с титром, указанным в инструкции. Смесь инкубируют 30-60 минут при температуре 37°С, после чего заражают ею культуру ткани, куриные эмбрионы или лабораторных животных. Контролем служит чувствительная система, зараженная вирусом обработанным нормальной сывороткой.

Положительной считают РН при отсутствии ЦПД в культуре клеток, изменений в куриных эмбрионах, а также заболнвания или гибели животных. На основании результатов РН определяют индекс нейтрализации – отношение титра вируса в контроле к титру вируса в опыте. Если индекс нейтрализации менее 10 – реакция отрицательная, от 11 до 49 – сомнительная, от 50 и выше – положительная (достоверное соответствие вируса антисыворотке).

Наиболее чувствительным вариантом РН является подавление вирусного бляшкообразования под действием вирусспецифической антисыворотки (реакция редукции вирусных бляшек). РН позволяет определить видовую и типовую принадлежность вируса.