Занятие №10

Тема. Патология почек.

Цель занятия. Изучить причины, механизм нарушения мочеобразования при патологии почек. Научить оценивать функциональное состояние почек по данным лабораторных исследований.

Теоретические вопросы.

1. Расстройства клубочковой фильтрации и секреции, причины, механизм развития.

2. Изменение суточного диуреза (поли-, олиго-, анурия), этиология и патогенез.

3. Изменения относительной плотности мочи (гипо-, гипер-, изостенурия), причины, механизм развития.

4. Оценка способности почек разводить и концентрировать мочу.

5. Протеинурия, гематурия, лейкоцитурия, цилиндрурия (другие патологические составные части мочи), их виды, причины, диагностическое значение.

6. Значение клиренса для оценки фильтрационной и экскреторной функции почек.

7. Экстраренальные симптомы и синдромы при заболеваниях почек (азотемия, анемия, артериальная гипертензия, отеки), механизм их развития.

8. Гломерулонефриты, этиология, патогенез, клинические проявления.

9. Нефротический синдром, виды, патогенез.

10. Почечно-каменная болезнь, этиология, патогенез, клинические проявления.

Работа №1. Определение концентрационной и очистительной способности почек при нефрозо-нефрите у собаки.

Материальное оснащение:

1. Пробирки центрифужные - 4 шт.

2. Штатив на 5 гнезд - 2 шт.

3. Пипетки на 1 мл - 6 шт.

4. Центрифуга лабораторная - 1 шт.

5. 10% раствор трихлоруксусной

кислоты - 10 мл

6. Раствор крахмала в капельнице - 3 мл

7. N/200 раствор йода - 20 мл

8. N/2000 раствор йода - 20 мл

9. Плазма крови (до и после введения

гипосульфита) собаки с нефрозо-

нефритом - по 2 мл

12. Моча (до и после введения гипо

сульфита) собаки с нефрозо-

нефритом - по 10 мл

11. Плазма крови (до и после введения

гипосульфита) здоровой собаки - по 2 мл

13. Моча (до и после введения гипо

сульфита) здоровой собаки - по 10 мл

Методика проведения опыта:

Нефрозо-нефрит у собаки воспроизводится путем введения почечного антигена со стимулятором Фрейнда.

У испытуемых собак (опытной и контрольной) натощак из ушной вены берут 5 мл крови в пробирку с 0,5 мл раствора цитрата натрия; пробы тщательно перемешивают. Одновременно с помощью катетера, вставленного в мочевой пузырь, извлекают первую порцию мочи в количестве 10 мл. В последующем вводят внутривенно 50% раствор гипосульфита из расчета 500 мг на 1 кг массы животного. Через 30 мин после введения вновь берут кровь и мочу. Стабилизированную кровь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин. Плазму отсасывают в центрифужную пробирку. Во всех взятых биологических жидкостях определяют концентрацию гипосульфита иодометрическим методом.

Концентрационный показатель (КП) вычисляют по следующей формуле:

КП = (М₂ – М₁) / (К₂ – К₁) · 50, где

K₁ и M₁ - количество йода, пошедшего на титрование первой порции крови и мочи, соответственно (в мл);

К₂и М₂ - количество йода, пошедшего на титрование второй порции крови и мочи, соответственно (в мл);

50 - постоянный коэффициент.

Показатель очищения - клиренс (С) вычисляют по формуле:

С = КП · Д, где

КП – концентрационный показатель;

Д – диурез за 1 мин (в мл).

Способ определения гипосульфита в биологичесих жидкостях.

К 1 мл плазмы крови прибавляют 1 мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты; содержимое пробирок тщательно перемешивают. Через 5 мин полученную смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин. Затем к 1 мл надосадочной жидкости (соответственно 0,5мл цельной плазмы) добавляют 1-2 капли крахмала и титруют в колбе N/2000 раствором йода до голубого окрашивания.

В пробирку берут 0,1мл мочи и прибавляют 1-2 капли крахмала. Жидкость титруют N/200 раствором йода до голубого окрашивания.

Количество йода, пошедшего на титрование гипосульфита в исследуемых биологических жидкостях, учитывается при подсчете концентрационного показателя и клиренса.

Полученные результаты заносят в таблицу (табл.1).

Таблица 1

Исследуемый материал	Количество йода, пошедшего на титрование, мл
Контроль	Опыт
Первая проба
Кровь
Моча
	Вторая проба
Кровь
Моча

В заключении обсуждают вероятные причины изменений изучаемых показателей выделительной функции почек при экспериментальном нефрозо-нефрите. Делают соответствующие выводы.

Работа №2. Микроскопическое исследование осадка мочи.

Материальное оснащение.

1. Пробирки центрифужные	- 2 шт.
2. Штатив на 5 гнезд	- 1 шт.
3. Пипетка на 5 мл	- 1 шт.
4. Пипетка пастеровская	- 1 шт.
5. Тонкие стеклянные палочки	- 2 шт.
6. Предметные стекла	- 10 шт.
7. Покровные стекла	- 10 шт.
8. Центрифуга лабораторная	- 1 шт.
9. Микроскоп	- 1 шт.
10. Суточная моча больного с острым гломерулонефритом (в стакане)	- 20 мл
11. Суточная моча здорового человека (в стакане)	- 20 мл

Ход анализа.

5 мл суточной мочи больного наливают в центрифужную пробирку после тщательного перемешивания. Мочу центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин.

Быстрым наклоном пробирки сливают прозрачный верхний слой, а оставшийся осадок переносят пастеровской пипеткой на середину предметного стекла и покрывают покровным. При этом надо стремиться перенести осадок с минимальным количеством жидкости, чтобы она не выходила за пределы покровного стекла.

Аналогичным способом обрабатывают мочу здорового человека.

Нативный препарат вначале (для общего обзора) изучают под малым увеличением (окуляр – 7^х, объектив – 8^х), а затем (для более детального изучения) - при большом увеличении (окуляр – 7^х, объектив – 40^х) микроскопа при опущенном конденсоре.

Элементы организованного и неорганизованного осадков мочи по возможности идентифицируют, а также зарисовывают в тетрадях.

Работа №3. Определение кровяного пигмента в моче.

Материальное оснащение.

1. Пробирки химические	- 7 шт.
2. Уксусно-эфирная вытяжка (20 мл ледяной уксусной кислоты + 40-50 мл эфира)	- 70 мл
3. Спиртовой раствор амидопирина (0,5г амидопирина + 10мл 96% спирта)	- 10 мл
4. 3% перекись водорода (3 части свежего пергидроля + 27 частей дистиллированной воды), раствор готовят непосредственно перед использованием	- 15 мл

Ход анализа.

В пробирку помещают 2-3мл уксусно-эфирной вытяжки, прибавляют 8-10 капель 5% спиртового раствора амидопирина и 8-10 капель 3% перекиси водорода. При наличии кровяного пигмента образуется фиолетовое окрашивание

Работа №4. Качественное определение белка в моче.

Материальное оснащение:

1. Пробирки простые - 2 шт.

2. Штатив на 5 гнезд - 1 шт.

3. Пипетки на 2 мл - 2 шт.

4. 20% раствор сульфосалициловой

кислоты (в капельнице) - 10 мл

5. Суточная профильтрованная моча

больного с острым гломеруло-

нефритом (в стакане) - 20 мл

6. Суточная профильтрованная моча

здорового человека (в стакане) - 20 мл

Ход анализа:

В пробирку наливают 2 мл мочи больного (опытная проба), куда прибавляют 3-5 капель 20% раствора сульфосалициловой кислоты.

Аналогичным способом обрабатывают мочу здорового человека (контрольная проба).

На темном фоне опытную пробу сравнивают с контрольной. Помутнение жидкости указывает на наличие белка в моче.

Работа № 5. Количественное определение белка в моче.

Материальное оснащение:

1. Пробирки простые - 10 шт.

2. Штатив на 5 гнезд - 2 шт.

3. Пипетки на 1 мл - 2 шт.

4. 20% раствор сульфосалициловой

кислоты (в капельнице) - 10 мл

5. Дистиллированная вода - 10 мл

6. Суточная профильтрованная моча

больного с острым гломеруло-

нефритом (в стакане) - 20 мл

7. Суточная профильтрованная моча

здорового человека (в стакане) - 20 мл

Ход анализа:

В пять пробирок наливают по 0,5 мл дистиллированной воды. В первую пробирку прибавляют 0,5 мл мочи больного (опытная проба). Затем в каждую последующую пробирку из предыдущей переносят по 0,5 мл разведенной мочи; из последней пробирки 0,5 мл жидкости удаляют. Таким образом получается ряд разведении (1:2; 1:4; 1:8; 1:16; 1:32) мочи. Далее во все пробирки добавляют по 2-3капли 20% раствора сульфосалициловой кислоты (под влиянием этой кислоты лабильные белки выпадают в осадок и жидкость в пробирке мутнеет). После встряхивания проб выясняют кратность разведения мочи, при которой появляется помутнение жидкости.

Аналогичное исследование проводят с мочой здорового человека (контрольная проба).

Концентрацию белка в моче (С, %) вычисляют поформуле:

С = А · 0,0015, где

А - степень разведения мочи;

0,0015 - постоянный коэффициент.

Работа №6. Изменение диуреза при сулемовом отравлении.

Материальное оснащение.

1. Универсальный штатив	- 1 шт.
2. Штатив для пробирок на 5 гнезд	- 1 шт.
3. Пробирки лабораторные	- 4 шт.
4. Нембутал 1%-ный	- 2 мл
5. Шприц на 1 мл	- 2 шт.
6. Сулема 1%-ная	- 1 мл
7. Физиологический раствор (0,85% NaCl)	- 5 мл
8. Пинцет анатомический	- 1 шт.
9. Ножницы глазные	- 1 шт.
10. Скальпель глазной	- 1 шт.
11. Воронки для животных	- 2 шт.
12. Воронки для пробирок	- 2 шт.
13. Бумага фильтровальная
14. Салфетки марлевые
15. Тампоны ватные
16. Животные: белые мыши	- 2 шт.

Методика проведения опыта.

Двум белым мышам одинаковой массы подкожно вводят по 1 мл физиологического раствора хлористого натрия. Одной из них за один день до опыта вводят 0,05 мл 1% раствора сулемы. Обеих мышей сажают в воронки, вставленные в градуированные пробирки для сбора мочи, на 1,5-2 часа. Через каждые 30 минут регистрируют количество выделившейся мочи. По окончании опыта обеих мышей усыпляют нембуталом (0,5 мл 1%-ного раствора внутрибрюшинно), вскрывают и производят осмотр почек, обращая внимание на их размеры, цвет, консистенцию. Результаты измерения вносятся в таблицу.

Измерение диуреза после “водной нагрузки”.

Объект исследования	Время (мин)

Диурез (мл)
Мышь контрольная Мышь опытная

Работа №7. Изменение диуреза при накоплении в крови азотистых шлаков.

Материальное оснащение.

1. Универсальный штатив	- 1 шт.
2. Штатив для пробирок на 5 гнезд	- 1 шт.
3. Пробирки лабораторные 4. Мочевина 2%-ная	- 4 шт. - 2 мл
4. Шприц на 1 мл	- 2 шт.
7. Физиологический раствор (0,85% NaCl)	- 5 мл
11. Воронки для животных	- 2 шт.
12. Воронки для пробирок	- 2 шт.
13. Бумага фильтровальная
14. Салфетки марлевые
15. Тампоны ватные
16. Животные: белые мыши	- 2 шт.

Методика проведения опыта.

Одной белой мыши в начале занятия подкожно вводят 1 мл 2% раствора мочевины, другой – такое же количество физиологического раствора хлористого натрия, после чего животных помещают в прикрытые сеткой воронки, вставленные в градуированные пробирки для сбора мочи, на 1,5-2 часа и через каждые 30 минут отмечают диурез.

Результаты заносят в таблицу.

Изменение диуреза после введения мочевины.